Yağlı merceğin büyütme oranı neden normal objektif merceğinkinden daha büyük?
Mikrobiyolojik deneylerde boyamadan önce bakterilerin sabitlenmesinin gerekli olmasının nedenleri:
1: Hücreleri öldürür, boya ile lekelenmesi kolaydır.
2: Bakterilerin cam slayta yapışmasını sağlayın ve su ile yıkanması kolay değildir.
Sabitlenirken yavaş yavaş kurutulmalıdır. Gerçekten hızlanmak istiyorsanız, alkol lambasının alevinin yukarısındaki mesafede birkaç kez kurutabilirsiniz. Cam sürgünün ısınmasına izin vermeyin, aksi takdirde bakterilerin yaşam formunu yok edebilir.
Gram boyama ve bakterilerin mikroskobik gözlemi
1. Deneysel ilke
Gram boyama prensibi: Bakteriler, hücre duvarlarının bileşimi ve yapısı nedeniyle Gram boyamaya farklı tepki verir. Gram-pozitif bakterilerin hücre duvarı esas olarak peptidoglikanın oluşturduğu bir ağ düğümüdür. Etanol ile işlendiğinde, ağ yapısının gözenek boyutu dehidrasyon nedeniyle küçülür ve geçirgenlik azalır, böylece kristal viyole-iyot kompleksinin hücrede ayrıştırılması ve tutulması kolay değildir ve mavi- Birincil boyama maddesinin mor rengi, renk giderme ve karşıt boyamadan sonra hala korunur. Gram-negatif bakterilerin hücre duvarının peptidoglikan tabakası incedir ve lipid içeriği yüksektir, bu nedenle renk giderme işlemi yapıldığında lipid etanol (veya aseton) ile çözülür ve hücre duvarının geçirgenliği artar, bu nedenle kristal viyole-iyot kompleksinin ayrıştırılması daha kolaydır ve bir karşıt boyama ile karşıt boyamadan sonra hücreler karşıt lekenin kırmızı rengiyle boyanır. Mikroskop görüntüleme prensibi: Modern sıradan optik mikroskoplar, görüntüyü büyütmek için oküler ve objektif lens olmak üzere iki lens sistemi kullanır, bu nedenle genellikle bileşik mikroskoplar olarak adlandırılırlar. Mikroskobun optik sisteminde, objektif merceğin performansı en kritik olanıdır ve mikrobiyolojik araştırma için en önemli olan yağ merceğinin büyütmesi en büyüğüdür. Cam lam ile lens arasına immersiyon yağı eklenmesindeki asıl amaç, aydınlatmanın parlaklığını arttırmak ve mikroskobun çözünürlüğünü arttırmaktır. Işığın kırılmasını veya toplam yansımasını azaltmak ve gözlenen görüntüyü daha net hale getirmek için ışık iletim ortamı olarak hava yerine yağ kullanılır.
2. Deneysel ekipman
1. Koloniler:
Escherichia coli 24h nutrient agar slant kültürü,
Staphylococcus aureus yaklaşık 24 saatlik besleyici agar slant kültürü, Bacillus subtilis 12-18h besleyici agar slant kültürü.
2. Çözeltiler veya reaktifler:
Damıtılmış su, iyot solüsyonu, kristal viyole boyama solüsyonu, yüzde 95 alkol, safranin boyama solüsyonu, sedir yağı. 3. Enstrüman:
Mikroskop, cam lam, aşılama özesi, alkol lambası, cımbız, lens dokusu.
3. Deneysel adımlar
a:
1. Smear
Slaytı çıkarın, slaydı ateşleyin, lam üzerindeki alkolü yakın ve sterilize edin, ortasına küçük bir damla damıtılmış su koyun, testin eğik ortamından az miktarda bakteri almak için aşılama döngüsünü kullanın tüp, Tüm süreç boyunca, test tüpünün ağzı alkol lambasının üzerinde olmalı ve kültür ortamının kirlenmesini önlemek için hız hızlı olmalıdır. Daha sonra küçük su damlacıklarını cam lam üzerine dairesel hareketlerle yayın, su damlacıkları bulanıklaştığında durun ve kurumasını ve sabitlenmesini bekleyin.
2. Birincil boyama
Koloninin üzerine kristal viyole damlatın (sadece bakteri filminin üzerini örtmek uygundur), 1-2 dakika lekeleyin, boyama solüsyonunu dökün ve elüat renksiz olana kadar lamın üstünden ince su ile durulayın, ve lekeyi slayt üzerine yerleştirin. Dilimlerin üzerindeki suyu silkeleyin.
3. Mordan
Kalıntı suyu yıkamak için damla damla iyot çözeltisi ekleyin, yaklaşık 1 dakika örtün ve suyla yıkayın.
4. Renk giderme
Cam lam üzerindeki suyu sallayın, cam slaydı eğin ve beyaz arka planın altında rengini açmak için yüzde 95 alkol ekleyin, çıkan alkol mavi görünmeyene kadar, hemen alkolü suyla durulayın ve cam slaydı sallayın dilimlerin üzerindeki suyu kapatın.
5. Karşıt boyama
Yaklaşık 1-2 dakika boyunca safranin solüsyonuyla karşı boyama yapın, suyla yıkayın ve ardından emici kağıtla kurulayın
6. Mikroskobik inceleme:
Düşük büyütmeli merceğin altında gözlenecek bakteri kolonisini arayın (slaydı hareket ettirin, kırmızı bir gölge hissederseniz hemen durun, büyütmeyi ayarlayın, koloni değilse bulmaya devam edin), mercek çerçevesini kaldırın, ve ardından yağ aynasına geçin. Numune alanına bir damla sedir yağı ekleyin ve merceği kaba ayarlayıcı ile dikkatli bir şekilde indirin, böylece yağ merceği yağa daldırılır ve neredeyse numuneye temas eder. Kondansatörü en yüksek konuma getirin ve diyaframı tamamen açın, kaba ayarlayıcıyı kullanarak mercek çerçevesini nesne görüntüsü görüş alanında görünene kadar yavaşça kaldırın ve net ve net hale getirmek için ince ayarlayıcıyı kullanın.
