Biyolojik Mikroskoplar Kullanılarak Doku Bloğu Hacminin Ölçülmesi
Şimdiye kadar kriyofiksasyon, dondurulmuş ultra-ince kesit alma ve dondurarak-kurutma, doku ve hücre X-ışını mikroskobu için rutin yöntemlerdir. Lütfen bu yöntemle ilgili aşağıdaki ayrıntıları sağlayın:
Spot ışıklı bir biyolojik mikroskop, orta düzeyde parlaklık elde etmek için spot ışığını yukarı ve aşağı hareket ettirebilir ve değişken açıklığın açıklığı da orta düzeyde parlaklık elde etmek için değiştirilebilir. Işık güneşten geliyorsa, spot ışığı uygun şekilde yükseltilebilir ve değişken ışığın açıklığı uygun şekilde genişletilebilir. Işık çok güçlüyse, spot ışığı uygun şekilde alçaltılabilir ve kavşak açıklığı uygun şekilde azaltılabilir. Bu durumda hala göz kamaştırıyorsanız, spot ışığının altındaki brakete uygun bir filtre yerleştirmeyi tercih edebilirsiniz. Bu meşe sizi tatmin edecek bir parlaklığa ulaşabilir. Elbette, spot ışığının üst ve alt konumlarını ayarlamak, ışık okumasının açıklık boyutunu değiştirebilir ve uygun filtreleri seçebilir, bu da belirli bir süre pratik ve deneyim gerektirir.
Biyolojik mikroskopide çok önemli bir konu, hücrelerin örneklenmesi ve izole edilmesi sürecidir. Dondurarak-kurutma ve reçine yerleştirmeden (FD) sonra, dondurulmuş ultra-ince kesitler, gözlem ve analiz sırasında her bir parçanın 65 element içeriğinin zarar görmediğinden emin olmak için dikkatli bir şekilde işlenmelidir. X-ışını mikroanalizinde yer alan çok sayıda adım ve yüksek maliyet nedeniyle, analiz edilen hücrelerin uzun süreli ve çok adımlı işlemden sonra hasar görmesi veya ölmesi durumunda yanlış sonuçlara varmak üzücüdür-. Jelatinaz işlemiyle ayrılan miyokardiyal hücrelerin iki formu vardır; biri uzun çubuk-şeklinde, diğeri ise daireseldir. İkincisi, hücre ayırma işlemi sırasında hasar gören ölmekte olan hücreleri ifade eder.
Bu iki tip hücredeki elektrolitlerin içeriği ve dağılımı biyolojik mikroskop altında çok farklıdır. Dairesel kardiyomiyositlerde Na çok yüksek ve K son derece düşüktür ve doğrusal dendritlerdeki Ca konsantrasyonu çok yüksektir. Diğer analitik yöntemlerle doğrulandıktan sonra, dairesel hücrelerdeki yüksek Na ve düşük K'nın ve mitokondrideki yüksek Ca'nın, hücre ayrılması sırasında membran hasarının sonucu olduğu kanıtlanmıştır. Hücreler ve dokular için soğuk sabitleme yöntemi genellikle ilk önce bunların söndürülmesini ve ardından sıvı nitrojen içinde saklanmasını içerir. Söndürme fiksasyonu koruma etkisi için çok önemlidir. Canlı hücreler veya taze dokular su açısından zengindir ve söndürüldüklerinde, hücrelerin veya dokuların soğutucuyla doğrudan temas eden kısımları (özellikle soğutma için sıvı nitrojen kullanıldığında) genellikle ilk önce dondurulur ve sabitlenir, bu da hücrelerin orta kısmının ezilip sabitlenmesini engelleyen bir "kabuk" oluşturur. Bu nedenle, X-ışını mikroanalizini yürütürken, çoğunlukla büyük hücrelerin orta kısmında buz kristallerinin mevcut olduğu bulunur. Bu durumu önlemek için soğutucu olarak erime noktası sıvı nitrojenden yüksek fakat 806c'den düşük olan bir madde kullanılır. Bu maddelerin birçoğu vardır, ancak elde edilmesi kolaydır ve en uygun fiyatlı olanı da hızlı bir soğuma hızına sahip olan konsantre propandır (kaynama noktası 42.120c, erime noktası 187.10c, molekül ağırlığı 44.1). Ancak dezavantajı yanıcı olmasıdır.
