Floresan Mikroskopun Özel Yapısal Bileşenleri Nelerdir?
Renk filtresi bloğu, floresan mikroskobunun önemli bir parçasıdır ve temel bileşenleri, uyarılma ışığı için bir birinci bariyer filtresi, emisyon ışığı için ikinci bir bariyer filtresi ve bir ışın bölme aynasından oluşur. Çeşitli üreticilerin renk filtresi modelleri ve adları çoğu zaman tutarsızdır.
1. Uyarma ışığı filtresi ve emisyon ışığı filtresi: Işık kaynağının ve floresan pigmentin özelliklerine bağlı olarak, belirli bir dalga boyu aralığında uyarım ışığı sağlamak ve numune tarafından uyarılan floresansın görüntüleme için göz merceğinden geçmesine ve ulaşmasına izin vermek için genellikle aşağıdaki üç eşleştirme türü seçilir.
UV uyarımı: Uyarma ışık filtresi, UV ışığının geçmesine izin verebilir ve 400 nm'nin üzerindeki görünür ışığın geçmesini engelleyebilir. İlgili emisyon ışık filtresi mavi ışığın geçmesine izin verir ve görüş alanındaki ışık, örneğin DAPI boyamaya uygulandığında mavi görünür.
Mavi ışık uyarımı: Uyarıcı ışık filtresi, mavi ışığın geçmesine izin verebilir ve diğer dalga boylarından gelen ışığı engelleyebilir. İlgili emisyon ışık filtresi, GFP boyama işaretleri gibi yeşil ışığın geçmesine izin verir.
Yeşil ışık uyarımı: Uyarma ışık filtresi, yeşil ışığın geçmesine izin verir ve diğer dalga boylarından gelen ışığı engeller. İlgili emisyon ışık filtresi genellikle Rhodamine boyama gibi kırmızı ışığın geçmesine izin verir.
2. Yarı şeffaf ve yarı yansıtıcı renk filtresi: İşlevi, uyarım ışığının geçmesini tamamen engellemek ve yansıtmaktır; Ve karşılık gelen dalga boyu aralığında ışık yayar. Modeli, uyarma ışığı filtresine ve emisyon ışığı filtresine karşılık gelir.
(2) Objektif lens ve mercek
Çeşitli objektif lensler uygulanabilir, ancak kendi floresansları son derece düşük olduğundan ve ışık iletim performansları (dalga boyu aralığı) floresans için uygun olduğundan, ölçek eklenmiş ve renk sapması azaltılmış lensleri seçmek en iyisidir. Mikroskop alanındaki bir görüntünün floresans parlaklığı, objektif merceğin açıklık oranının karesiyle doğru orantılı, büyütmeyle ise ters orantılı olduğundan, floresans görüntülerin parlaklığını iyileştirmek için daha büyük açıklık oranına sahip bir objektif mercek kullanılmalıdır. Özellikle floresansın yetersiz olduğu örnekler için, yüksek diyafram açıklığına ve yüksek ışık geçirgenliğine sahip bir objektif lensin yanı sıra mümkün olan en düşük büyütmeye sahip bir göz merceği kullanılmalıdır.
(3) Diğer optik cihazlar
Bir aynanın yansıtıcı katmanı genellikle alüminyumla kaplanır çünkü alüminyum, mavi mor bölgede ultraviyole ve görünür ışığı daha az emer ve %90'ın üzerinde yansıtır (gümüşün yansıtma oranı yalnızca %70'tir). Genellikle düz aynalar kullanılır. Floresan mikroskoplar için özel olarak tasarlanıp üretilen odaklama merceği, kuvars camdan veya ultraviyole ışığı ileten başka bir camdan yapılır. Düşen ışık cihazı, geçirgen bir ışık kaynağı işlevine sahip olmasının yanı sıra, kalın plakalar, filtre membranları, bakteri kolonileri, doku kültürleri ve diğer numuneler gibi opak ve yarı şeffaf numunelerin doğrudan gözlemlenmesi için daha uygundur. Son yıllarda, düşen ışıklı floresans mikroskobu olarak bilinen düşen ışıklı bir cihaz kullanılarak birçok yeni floresans mikroskobu türü geliştirilmiştir.
(4) Işık kaynağı
Günümüzde ışık kaynağı olarak genellikle 50 veya 100 W'lık yüksek-basınçlı cıva lambaları kullanılmaktadır. Çalışma sırasında iki elektrot arasında deşarj meydana gelir ve bu durum cıvanın buharlaşmasına ve küre içindeki basıncın hızla artmasına neden olur (bu işlem genellikle yaklaşık 5-15 dakika sürer). Bu işlem sırasında ışık kuantumları yayılır ve salınan ışığın dalga boyu çeşitli floresan maddeleri uyarmaya yeterlidir. Bu nedenle floresans mikroskoplarında yaygın olarak kullanılır.
Cıva lambalarının hizmet ömrü nispeten kısadır, genellikle 200 saattir. Hizmet ömründeki bu sınırlamaya yanıt olarak, son yıllarda, 2000 saatlik süper uzun ampul ömrüne ve esnek kullanıma sahip yeni bir tür floresan ışık kaynağı X-Cite yaygın olarak kullanılmaktadır -, ön ısıtma gerektirmez, kullanıma hazırdır.
