Floresan Mikroskobu Prensibi ve Uygulaması
(1) Floresan mikroskobunun prensibi ve yapısal özellikleri: Floresan mikroskobu, filtre sisteminden belirli bir dalga boyundaki ışığı (3650 inç ultraviyole ışık veya 4200 inç mor mavi ışık gibi) yaymak için yüksek ışık verimliliğine sahip bir nokta ışık kaynağı kullanır. numuneyi uyarmak için uyarma ışığı olarak. İçerisindeki flüoresan madde çeşitli renklerde flüoresans yaydıktan sonra, objektif merceğin ve okülerin büyütülmesiyle gözlenir. Bu sayede, güçlü kontrastlı bir arka plan altında, floresans çok zayıf olsa bile, tanımlanması kolaydır ve yüksek hassasiyete sahiptir. Esas olarak hücre yapısı ve işlevi ile kimyasal bileşimin araştırılması için kullanılır. Floresan mikroskobunun temel yapısı, sıradan bir optik mikroskop ve bazı aksesuarlardan (floresan ışık kaynağı, uyarma filtresi, iki renkli ışın ayırıcı ve bloke edici filtre, vb.) oluşur. Floresan ışık kaynağı - genellikle çeşitli dalga boylarında ışık yayan ultra yüksek basınçlı cıva lambası (50-200W) kullanılır, ancak her floresan maddenin en güçlü floresanı üreten bir uyarma dalga boyu vardır, bu nedenle bir tane eklemek gerekir uyarma filtresi (Genellikle, yalnızca belirli bir dalga boyundaki uyarma ışığının diğer ışığı emerken numuneden geçmesine ve numuneyi ışınlamasına izin veren ultraviyole, mor, mavi ve yeşil uyarma filtreleri vardır. Her bir madde uyarma ışığı ile ışınlandıktan sonra çok kısa bir sürede ışınlama dalga boyundan daha uzun dalga boyuna sahip görünür floresans yayar. Floresans spesifiktir ve genellikle uyarma ışığından daha zayıftır. Spesifik flüoresanı gözlemlemek için, objektif merceğin arkasında bloke edici (veya baskılayıcı) bir filtre gereklidir. İki işlevi vardır: biri, floresanı bozmamak ve gözlere zarar vermemek için uyarma ışığının okülere girmesini engellemek ve absorbe etmektir; diğeri, belirli bir flüoresan rengi göstererek belirli bir flüoresanı seçmek ve geçmesine izin vermektir. İki filtre birlikte kullanılmalıdır.
Optik yolları açısından iki tür floresan mikroskop vardır:
1. Transmisyon floresans mikroskobu: Uyarma ışık kaynağı, yoğunlaştırıcı mercek yoluyla numune materyali boyunca flüoresanı harekete geçirir. Yaygın olarak bir karanlık alan toplayıcı kullanılır ve aynayı uyarma ışığının numuneye iletilmesi ve baypas edilmesi için ayarlamak için sıradan bir toplayıcı da kullanılabilir. Bu eski moda bir floresan mikroskobu. Avantajı, floresansın düşük büyütmede güçlü olmasıdır ve dezavantajı, büyütmenin artmasıyla floresansın azalmasıdır. Bu nedenle, daha büyük numune malzemelerini gözlemlemek daha iyidir.
2. Epi-floresan mikroskobu Bu, modern zamanlarda geliştirilen yeni bir floresan mikroskobu türüdür. Aradaki fark, uyarma ışığının objektif merceğinden numunenin yüzeyine düşmesidir, yani aydınlatma kondansatörü olarak aynı objektif merceğin ve floresan toplamak için objektif merceğin kullanılmasıdır. Işık yoluna, hafif uranyumdan 45 derece uzakta olan bir dikroik ışın ayırıcının eklenmesi gerekir. Uyarma ışığı objektif merceğe yansıtılır ve numune üzerinde toplanır. Numune tarafından üretilen floresan ve objektif merceğin mercek yüzeyi ve kapak camı yüzeyi tarafından yansıtılan uyarma ışığı aynı anda objektif merceğe girer ve uyarma ışığını floresanstan ayırmak için iki renkli ışın ayırıcıya geri döner , artık uyarma ışığı bloke edici filtreler tarafından emilir. Farklı uyarma filtreleri/iki renkli ışın ayırıcılar/engelleme filtreleri kombinasyonuna geçerseniz, farklı flüoresan reaksiyon ürünlerinin ihtiyaçları karşılanabilir. Bu tür bir floresan mikroskobunun avantajı, görüş alanının aydınlatmasının tekdüze olması, görüntülemenin net olması ve büyütme ne kadar büyük olursa, floresansın o kadar güçlü olmasıdır.
(2) Floresan mikroskobu nasıl kullanılır?
1. Işık kaynağını açın, ultra yüksek basınçlı cıva lambasının en parlak noktaya ulaşması için birkaç dakika ısınması gerekir.
2. Transmisyon floresan mikroskobu için, ışık kaynağı ile kondansatör arasına gerekli uyarma filtresi takılmalı ve ilgili engelleme filtresi objektif merceğin arkasına takılmalıdır. Epi-floresan mikroskopların ışık yolundaki yuvalara gerekli uyarma filtresi/çift renkli ışın ayırıcı/bloke edici filtre eklerini yerleştirmesi gerekir.
3. Düşük büyütmeli bir mercekle gözlemleyin ve ışık kaynağının merkezini, tüm aydınlatma noktasının merkezinde yer alacak şekilde farklı tipte floresan mikroskoplarının ayar cihazına göre ayarlayın.
4. Numune sayfasını yerleştirin ve odaklandıktan sonra gözlemleyin. Kullanım sırasında dikkat edilmelidir: Gözlere zarar vermemek için doğrudan uç filtre ile gözlem yapmayın; numuneyi bir yağ merceği ile gözlemlerken, flüoresansız özel bir yağ merceği kullanılmalıdır; yüksek basınçlı cıva lambası kapatıldıktan sonra hemen tekrar açılamaz ve test edilmesi gerekir. 5 dakika sonra yeniden başlatılabilir, aksi takdirde kararsız hale gelir ve cıva lambasının ömrünü etkiler.
(3) Gözlem Öğretim platformunda bir flüoresan mikroskop altında mavi-mor bir ışık filtresi kullanılarak, yüzde o.01 akridin turuncu flüoresan boya ile boyanmış hücrelerin, çekirdeğin ve sitoplazmanın iki farklı renk üretmek üzere uyarıldığı görülebilir. floresan (koyu) yeşil ve turuncu-kırmızı).
