Elektron mikroskobu için biyolojik numunelerin hazırlanması ve gözlemlenmesi
Mikroskobun çözünürlüğü kullanılan ışığın dalga boyuna bağlıdır. 1933'te ortaya çıkmaya başlayan elektron mikroskobu, ışık kaynağı olarak görünür ışığın dalga boyundan çok daha kısa olan bir elektron ışınını kullanır, böylece elde edebileceği çözünürlük, optik mikroskopla karşılaştırıldığında büyük ölçüde artar. Işık kaynaklarındaki farklılık aynı zamanda elektron mikroskopları ile optik mikroskoplar arasındaki bir dizi farklılığı da belirler.
Elektron ışını görüntüleme prensiplerindeki farklılıklara ve numuneler üzerindeki farklı etki yollarına göre, modern elektron mikroskopları birçok türe dönüşmüştür. Günümüzde en yaygın kullanılanlar transmisyon elektron mikroskopları ve taramalı elektron mikroskoplarıdır. İlkinin toplam büyütmesi 1000-1000000 arasında olabilir. İkincisinin toplam büyütülmesi 20 ila 300000 kat arasında değişebilir. Bu deney temel olarak iki tip mikroskop örneğinin, transmisyon elektron mikroskobu ve taramalı elektron mikroskobunun hazırlanmasını tanıtmaktadır.
2. Ekipman
1. Bakteri Escherichia coli (Escherichia coli) eğimli.
2. Solüsyon veya reaktif amil asetat, konsantre sülfürik asit, mutlak etanol, steril su, %2 sodyum fosfotungstat (pH 6.5-8.0) sulu solüsyon, 0.3% polietilen formaldehit (kloroformda çözünür) çözeltisi, hücreler Pigment c, amonyum asetat, plazmid pBR322.
3. Aletler veya diğer mutfak eşyaları: sıradan optik mikroskop, bakır ağ, porselen huni, deney kabı, tabak, steril damlalık, steril cımbız, iğneler, slaytlar, sayma tahtası, vakum kaplama makinesi, kritik nokta kurutucusu vb.
3. Operasyon adımları
(1) Transmisyon elektron mikroskobu için numune hazırlama ve gözlem
1. Metal ağın işlenmesi
Optik mikroskopi numunesi gözlem için bir cam slayt üzerine yerleştirilir. Bununla birlikte, transmisyon elektron mikroskobunda elektronlar cam tabakaya nüfuz edemediğinden, ağ malzemeleri yalnızca taşıyıcı olarak kullanılabilir, genellikle taşıyıcı ağlar olarak adlandırılır. Taşıyıcı ağ, farklı malzeme ve şekillerden dolayı birçok farklı spesifikasyona ayrılabilir; bunların arasında en sık kullanılanı 200-400 ağ (delik sayısı) bakır ağdır. Bakır ağ, kiri çıkarmak ve temiz tutmak için kullanımdan önce işlemden geçirilmelidir, aksi takdirde destek filminin kalitesi ve örnek fotoğrafların netliği etkilenir. Bu deneyde, şu şekilde işlenebilen 400- örgülü bir bakır ağ kullanılmaktadır: önce onu birkaç saat amil asetatla ıslatın ve ağartın, ardından birkaç kez damıtılmış suyla durulayın ve ardından bir süre mutlak etanolde bekletin. dehidrasyon. Yukarıdaki yöntemlerden sonra bakır ağ hala temiz değilse, seyreltik konsantre sülfürik asitte (1:1) 1 ila 2 dakika bekletebilir veya %1 NaOH çözeltisinde birkaç dakika kaynatıp damıtılmış su ile durulayabilirsiniz. birkaç kez sulayın ve ardından etanol içindeki susuz Dehidrat'a koyun ve bir kenara koyun.
2. Destek membranının hazırlanması
Numuneleri incelerken taşıyıcı ağ aynı zamanda yapılandırılmamış, tekdüze bir film tabakasıyla kaplanmalıdır, aksi takdirde taşıyıcı ağın deliklerinden küçük numuneler dışarı sızacaktır. Bu filme genellikle destek filmi veya taşıyıcı film adı verilir. Destek filmi elektron geçirgen olmalı ve kalınlığı genellikle 20 nm'den az olmalıdır; elektron ışınının etkisi altında, filmin yapısal stabiliteyi korumak ve iyi bir termal iletkenliğe sahip olmak için belirli bir mekanik mukavemete sahip olması gerekir; Ayrıca elektron mikroskobunda destek ağı kullanılmalıdır. Altında görünür bir yapı bulunmamalı, taşınan numuneyle kimyasal reaksiyon oluşmamalı ve numunenin gözlemlenmesine engel olmamalıdır. Kalınlığı genellikle yaklaşık 15nm'dir. Destekleyici film, plastik film (kolodyum film, polietilen formaldehit film vb. gibi), karbon film veya metal film (berilyum film vb. gibi) olabilir. Normal çalışma koşullarında plastik film gereksinimleri karşılayabilir. Plastik filmler arasında kolodyum filmin hazırlanması nispeten kolaydır ancak mukavemeti polietilen formaldehit filmi kadar iyi değildir.
