PH ölçer - Ortam pH'ının belirlenmesi ve ayarlanması
Tüm mikroorganizmalar yaşadıkları ortamın pH değerinden etkilenirler. Genellikle seçici türlerin varlığı, içinde büyüdükleri pH aralığını daraltır. Bazen ortamın asitliği veya alkaliliği de bir büyüme seçim faktörü olarak işlev görebilir. Bununla birlikte, biyokimyasal test ortamları için, mikroorganizmaların substratta tk aktivitesi sergilediği pH aralığı, büyüme için gereken pH aralığından daha dardır: bu nedenle, ortamın pH'ını beklenen aralığa ayarlamak önemlidir. Laboratuvar besiyerini besiyerinin bileşimine göre hazırlarken, pH kontrol edilmeli ve ayarlanmalıdır. Üretici tarafından sağlanan hazır sentetik suyu alınmış ortam için bile (özellikle bazı stok suyu alınmış ortamlar için), deney ortamı hazırlandıktan sonra son pH'ın ölçülmesi gerektiğine işaret edilmelidir.
Bir ortamın pH'ını ölçmenin en doğru yolu bir pH metre kullanmaktır. Kullanmadan önce, bilinen pH değerinde (genellikle pH 4 ila 7'dir) standart bir tampon çözeltisi ile kalibre edilmelidir. pH metrenin elektrodunu damıtılmış suyla çalkalayın ve beherdeki kültür ortamına daldırın ve ardından kültür ortamının pH'ını pH metre ölçeğinden okuyun. Her üretici, her bir pH metre türü için ayrıntılı çalıştırma talimatları sağlar.
Kültür ortamı hazırlanırken, pH, mekanik karıştırmalı bir pH metre kullanılarak kolaylıkla ayarlanabilir. Kültür ortamı sürekli karıştırılabilen bir kapta (büyük bir beher gibi) hazırlanmalıdır. veya teflon sarılı mıknatıslar. Agar içeren besiyerinin pH'ının, ısıtılabilir bir manyetik karıştırıcı ile kolaylıkla yapılabilen çözdürme işleminden sonra ayarlanması gerekir. pH'ı ayarlarken, önce pH metreyi kalibre etmek için bilinen pH değerine sahip standart bir tampon solüsyonu kullanın. Daha sonra kompozit elektrodu ve dirençli termometreyi (varsa) ortama koyun, beherin ucundan elektrottan uzakta uygun miktarda hidroklorik asit ve sodyum hidroksiti yavaşça ekleyin, böylece ortam gerekli pH'a ulaşabilir ve bunu koruyabilir.
pH metrenin sıcaklık dengelemesi, sıcaklığın elektrot sistemi üzerindeki etkisini dikkate almalıdır: bazı dilüsyonlarda ve ortamlarda, pH sıcaklıkla önemli ölçüde değişir. Sıvı ortamlar ve seyreltmeler için, pH genellikle 25 derecede veya kullanıldıkları sıcaklıkta ayarlanabilir ve ölçülebilir.
Agar ortamının pH'ı çözündükten sonra ayarlanmalıdır ve çözünme sıcaklığı 45 derecenin üzerindedir: bu nedenle katı ortamın pH'ı kullanım sıcaklığında belirlenmelidir. Bu sırada düz kafalı bir kompozit elektrot kullanılmalı ve pH metrenin sıcaklık kompanzasyonu manuel olarak kalibre edilmelidir. Kültür ortamı hazırlanırken, kültür ortamının pH'ının erime durumu ile katılaşma durumu arasında farklı olduğu belirlenirse, bu pH ayarlamasında bir hata olduğu anlamına gelir.
Aynı şekilde, hazırlanan ortam ısıyla sterilize edildiğinde (örn. otoklavlandığında), pH değişikliklerine de maruz kalabilir. Kurutulmuş besiyeri için üretici bunu dikkate almıştır ve genellikle pH ayarlamasına gerek yoktur ancak kullanılacak besiyerinin pH'ı dikkatle kontrol edilmelidir. Susuzlaştırılmış agar ortamının pH'ının yeniden çözme veya hazırlama sırasında ayarlanması gerekiyorsa, ortamın aşırı ısınmasını önlemek için sterilizasyon adımından sonra filtre ile sterilize edilmiş hidroklorik asit ve sodyum hidroksit çözeltisi ile ayarlamak en iyisidir. Farklı ham maddeler veya farmasötiklerle besiyeri hazırlanırken, besiyerinin pH'ı otoklavlamadan sonra kontrol edilmelidir. Ayrıca, her otoklavdan sonra ortamın pH'ının aynı şekilde değiştiği bulunursa, ortam hazırlanırken pH uygun şekilde ayarlanabilir. Bununla birlikte, sterilizasyondan sonra besiyerinin nihai pH'ının belirlenmesi hala gereklidir.
