Faz kontrast mikroskobu için hata ayıklama yöntemleri ve adımları
A. Kuhler aydınlatma sisteminin ayarlanması temelinde, numuneyi net bir şekilde odaklamak için parlak alan yöntemini kullanın;
B. Spot ışığını Ph1'e çevirin ve döner tabla üzerindeki ölçek çizgisiyle hizalayın. 10 x faz kontrast hedefi seçin ve bunu gözlemlenecek şeffaf örnekle değiştirin;
C. Göz merceklerinden birini çıkarın, onu merkezleme teleskopuyla değiştirin ve görüş alanındaki iki kontrast halkasına odaklanın (objektif merceğin siyah kontrast halkası ve yoğunlaştırıcı merceğin geçirgenlik kontrast halkası);
D. Görüş alanındaki iki fark halkası mutlaka çakışmayabilir. İki ayarlama cihazını spot ışığında ayarlayın (ön ve arka konumları ayarlamak için fark halkalarının sol ve sağ konumlarını ayar çubukları ve sürtünme tipi düğmelerle ayarlayarak), böylece şeffaf halka siyah halkayla çakışacak şekilde ileri geri hareket eder. ;
e. Ayarlamadan sonra, gözlem merceğine geri dönün ve numunenin faz farkı görüntüsünü gözlemlemek için yeşil filtreyi optik yola doğru bastırın;
F. 20x ve 40x objektif lenslerle gözlem yaparken spot ışığı Ph2 konumuna, 100x objektif lens kullanırken spot ışığı Ph3 konumuna ayarlanmalıdır.
Uygulama kapsamı: Çeşitli hücreler, canlı dokular, lekesiz veya lekesiz doku dilimleri, suda yaşayan organizmalar vb. gibi şeffaf, lekesiz veya lekesiz örneklerin gözlemlenmesi için uygundur.
Faz kontrast mikroskobunun temel prensibi
Işık nispeten şeffaf bir numuneden geçtiğinde, ışığın dalga boyunda (renginde) ve genliğinde (parlaklığında) önemli bir değişiklik olmaz. Bu nedenle, boyanmamış numuneleri (canlı hücreler gibi) normal bir optik mikroskop altında incelerken, bunların morfolojisini ve iç yapısını ayırt etmek genellikle zordur. Bununla birlikte, hücrenin farklı bölümlerinin kırılma indeksi ve kalınlıklarındaki farklılıklar nedeniyle, bu numuneden geçerken doğrudan ve kırılan ışığın optik yolunda farklılıklar olacaktır. Optik yol arttıkça veya azaldıkça, hızlanan veya geciken ışık dalgalarının fazı değişecektir (faz farkına neden olacaktır). Işığın faz farkı çıplak gözle hissedilemez, ancak faz farkı mikroskobu özel cihazını (dairesel bir açıklık ve bir faz plakası) kullanabilir ve ışığın girişim olayını kullanarak ışığın faz farkını bir genlik farkına dönüştürebilir. (aydınlık ve karanlık farkı) insan gözünün algılayabileceği bir durumdur. Bu, başlangıçta şeffaf olan nesnenin bariz ışık ve karanlık farklılıkları göstermesini sağlar, kontrastı artırır ve sıradan optik mikroskoplar ve karanlık alan mikroskopları altında görülemeyen veya açıkça görülemeyen canlı hücreleri ve hücrelerin içindeki bazı ince yapıları açıkça gözlemlememize olanak tanır.
Faz kontrast mikroskobunun görüntüleme prensibi: Optik kaynak yalnızca dairesel bir açıklığa sahip şeffaf bir halkadan geçebilir ve bu daha sonra bir ışık ışınına odaklanır. Bu ışık demeti test edilen nesnenin içinden geçtiğinde, her parçanın farklı optik yollarından dolayı değişen derecelerde sapmaya (kırınıma) maruz kalır. Şeffaf halkanın oluşturduğu görüntünün, faz plakası üzerindeki eşlenik yüzey ve objektif merceğin arkasındaki odak düzlemi ile çakışması nedeniyle. Bu nedenle, sapmayan doğrudan ışık eşlenik yüzeyden geçerken, sapmış kırılan ışık telafi edici yüzeyden geçer. Faz plakasındaki eşlenik yüzey ve dengeleme yüzeyinin farklı özelliklerinden dolayı, bu iki parçadan geçen ışığın sırasıyla belirli bir faz farkı ve yoğunluk azalması oluşturacaktır. İki ışık seti daha sonra arka mercek boyunca birleşecek ve aynı optik yol üzerinde ilerleyerek doğrudan ve kırılan ışık arasında girişime neden olacak ve faz farkını genlik farkına dönüştürecektir. Böylece faz kontrast mikroskobu sırasında insan gözünün ayırt edemediği faz farkı, renksiz, şeffaf bir gövdenin ışığı sayesinde insan gözünün ayırt edebileceği bir genlik farkına (parlaklık farkına) dönüştürülür.
