Mikrobiyal hücrelerin şeklini görmek için ne tür bir mikroskop kullanılır?
Bireylerin çıplak gözle gözlemlemesi zor olan tüm küçük organizmalar için ortak bir terim. Mikroorganizmalar arasında bakteriler, virüsler, mantarlar ve birkaç alg bulunur. (Bununla birlikte mantarlara ait mantarlar, Ganoderma lucidum vb. gibi bazı mikroorganizmalar çıplak gözle görülebilmektedir.) Virüsler, nükleik asitler ve proteinler gibi birkaç bileşenden oluşan bir "hücre dışı organizmalar" türüdür, ancak bunların hayatta kalma canlı hücrelere bağlı olmalıdır. Var olan farklı ortamlara göre prokaryotik mikroorganizmalar, uzay mikroorganizmaları, mantar mikroorganizmaları, maya mikroorganizmaları, deniz mikroorganizmaları vb. olarak ayrılabilirler.
Mikroorganizmaların rolü ve zararı:
Mikroorganizmaların insanlar üzerindeki en önemli etkilerinden biri bulaşıcı hastalıkların yaygınlığıdır. İnsan hastalıklarının yüzde 50'sine virüsler neden oluyor. İnsanda hastalığa neden olan mikropların tarihi, insanoğlunun bunlarla sürekli mücadelesinin tarihidir. İnsanlar, hastalıkların önlenmesi ve tedavisinde büyük ilerleme kaydetti, ancak etkili terapötik ilaçlardan yoksun çok sayıda viral hastalık gibi yeni ve yeniden ortaya çıkan mikrobiyal enfeksiyonlar meydana gelmeye devam ediyor. Bazı hastalıkların patojenik mekanizması net değildir. Çok sayıda geniş spektrumlu antibiyotiğin suistimali, güçlü seçilim baskısına neden olarak birçok suşun mutasyona uğramasına neden olarak ilaç direncinin ortaya çıkmasına neden olmuş ve insan sağlığı yeni tehditlerle tehdit edilmiştir. Bazı bölümlere ayrılmış virüsler, rekombinasyon veya yeniden sınıflandırma yoluyla mutasyona uğrayabilir. En tipik örnek influenza virüsüdür.
Mikroorganizmaların özel tanımını öğrendikten sonra, deneyi yapan kişi mikroorganizmaları görmek için çalışırken ne tür mikroskop kullanmalıdır ve daha iyi görmek ve yaygın mikrobiyal formları gözlemlemek ve analiz etmek için hangi mikroskop kullanılabilir.
Mikroskobun icadı, çıplak gözle görülemeyen gülümseyen cisimleri görebilmektir. Mikroorganizmaların boyutları çok küçüktür, bu nedenle mikroskop yardımıyla büyütülmeleri ve gözlemlenmeleri gerekir. Ek olarak, birçok mikroorganizma türü vardır, bu nedenle temel olarak optik mikroskopların çoğu mikroorganizmaları gözlemlemek için, sonraki soru mikroorganizmaların gözlemlenmesi ve analizi için ne tür mikroskopların kullanılması gerektiğidir. Mikrobiyal morfoloji gözlemi için yaygın mikroskoplar arasında biyolojik mikroskoplar, faz kontrast mikroskopları, ters mikroskoplar, floresan mikroskoplar ve konfokal mikroskoplar bulunur. Mikroskop vb.
Aşağıda mikroorganizmaları gözlemlemek için kullanılan çeşitli mikroskoplar açıklanmaktadır:
1. Sıradan ışık mikroskobu
Işık kaynağı olarak doğal ışık veya ışık kullanılır ve dalga boyu yaklaşık {{0}},4 μm'dir. Mikroskobun çözünürlüğü dalga boyunun yarısı, yani 0,2 μm'dir ve çıplak gözle görülebilen en küçük görüntü 0,2 mm'dir. Bu nedenle, 1000 kat büyütmek için bir yağ (daldırma) ayna kullanmak, 0,2μm parçacıkları çıplak gözle görülebilen 0,2 mm'ye büyütebilir. Bakterilerin, aktinomisetlerin ve mantarların gözlemlenmesi için sıradan optik mikroskoplar kullanılabilir.
2. Karanlık alan mikroskobu, lekelenmemiş mikrobiyal morfoloji ve hareketi gözlemlemek için yaygın olarak kullanılır. Karanlık alan kondansatörü sıradan mikroskopta kurulduktan sonra, ışık doğrudan ortadan nüfuz edemez ve görüş alanı karanlıktır. Numune, kondansatörün kenarından eğik ışık aldığında dağılabilir, böylece karanlık alan arka planında bakteri veya spiroketler gibi parlak mikroorganizmalar gözlemlenebilir.
3. Faz kontrast mikroskobu Faz kontrast mikroskobu, ışık fazını ve doğrudan ışığın genliğini değiştirmek ve ışık fazı farkını ışık yoğunluğu farkına dönüştürmek için faz farkı plakasının ışık efektini kullanır. Faz kontrast mikroskobu altında, ışık boyanmamış bir numuneden geçtiğinde, ışık fazındaki fark, numunenin farklı bölümlerinin yoğunluğunun tutarsızlığından kaynaklanır ve mikroorganizmaların morfolojisi, iç yapısı ve hareket şekli gözlemlenebilir.
4. Floresan mikroskobu Floresan mikroskobu temel olarak sıradan optik mikroskopla aynıdır, temel fark ışık kaynağı, filtre ve kondansatördür. Şu anda, çoğu epi-light cihazları kullanıyor ve ultraviyole veya mavi-mor ışık yayan ışık kaynağı olarak yüksek basınçlı cıva lambaları yaygın olarak kullanılıyor. İki tür filtre vardır: uyarma filtresi ve absorpsiyon filtresi. Genel parlak alan kondansatörlerine ek olarak, floresan ve arka plan arasındaki kontrastı artırmak için mavi ışık kullanan floresan mikroskoplarında karanlık alan kondansatörleri de kullanılabilir. Bu yöntem, flüoresan pigmentlerle boyanmış veya flüoresan antikorlarla birleştirilmiş bakterilerin tespitine veya tanımlanmasına uygulanabilir.
5. Elektron mikroskopları, ışık kaynağı olarak elektron akışını kullanır. Görünür ışıkla karşılaştırıldığında, dalga boyu on binlerce kat farklıdır ve bu da çözünürlüğü büyük ölçüde artırır. Manyetik bobin, optik amplifikasyon sistemi olarak kullanılır ve büyütme onbinlerce veya yüzbinlerce kez ulaşabilir. Genellikle virüs partiküllerinde kullanılır. ve bakteriyel ince yapının gözlemlenmesi.
Boyanmamış mikrobiyal numunelerin gözlemlenmesi:
Boyanmamış numuneler genellikle bakteri morfolojisini, gücünü ve hareketini gözlemlemek için kullanılabilir. Bakteriler boyanmadıklarında renksiz ve şeffaftırlar ve mikroskop altında esas olarak bakterilerin kırılma indeksi ile çevredeki ortam arasındaki farkla gözlenirler. Kamçılı bakteriler kuvvetli hareket ederken, kamçısız bakteriler düzensiz Brownian hareketi gösterir. Treponema pallidum, Leptospira ve Campylobacter gibi canlı bakteriler, tanısal önemi olan farklı şekillere ve hareket modellerine sahiptir. Yaygın olarak kullanılan yöntemler, basınç düşürme yöntemi, askıda bırakma yöntemi ve kapiler yöntemdir.
1. Asılı damla yöntemi Temiz içbükey cam lamın içbükey deliğinin çevresine vazelin sürün, aşılama özeli bir bakteri süspansiyonu halkası alın ve kapak camının ortasına koyun, ardından içbükey cam slaydın içbükey deliğini Lamelin ortasına damlatın ve Kapağı takın, ardından hızlıca ters çevirin, içbükey deliğin kenarındaki vazeline sıkıca yapışmasını sağlamak için lameli hafifçe bastırın ve ardından yüksek güç altında gözlemleyin mikroskop (veya karanlık alan).
2. Aşılama özesi olan bir bakteri süspansiyonu halkası alın ve bunu basınç düşürme yöntemiyle temiz bir cam lamın ortasına yerleştirin ve hava kabarcığı oluşmasını önlemeye ve taşan bakteriyel süspansiyon. Yüksek güçlü bir mercek altında aydınlık alan (veya karanlık alan) gözlemi.
3. Kılcal yöntem esas olarak anaerobik bakterilerin kinetiklerinin incelenmesi için kullanılır. Genellikle 60~70mm uzunluğunu seçin. Anaerobik bakteri süspansiyonunu 0.5-1.0 mm açıklığa sahip bir kılcal damardan sifonladıktan sonra, kılcalın iki ucunu bir alevle kapatın. Kapiler plastik kağıt ile cam slayt üzerine sabitlendi ve karanlık alanda yüksek güçlü bir mercek altında gözlendi.
Lekeli mikrobiyal numunelerin mikroskopla gözlemlenmesi:
Bakteri örneği boyandıktan sonra, bakteri ve çevre arasındaki keskin renk kontrastı nedeniyle bakterinin morfolojik özellikleri (boyut, şekil, diziliş vb.) ve bazı özel yapılar belirlenebilir. sıradan bir optik mikroskop altında (kapsüller, flagellalar, sporlar vb.)
(1) Bakteriyel boyamanın genel prosedürü Bakteriyel boyamanın genel prosedürü şu şekildedir: yayma (kurutma)—sabitleme—boyama.
1. Smear Kan, sekresyonlar, ekskresyonlar, ponksiyon sıvısı ve sıvı kültürünün hazırlanması ve cam lamlar üzerinde doğrudan ince film yaymalarının hazırlanması; otopsi veya enfekte hayvan dokuları, numune almak için lezyonu bir pamuklu çubukla sürün. Katı besiyerinde bakteri kolonilerinin veya çimlerin hazırlanması için, önce bir normal salin halkası alıp slaydın ortasına koymak için bir aşılama döngüsü kullanın, ardından az miktarda kültür almak ve öğütmek için steril bir aşılama döngüsü kullanın normal salin içinde eşit olarak dağıtın ve 1cm2 Büyük veya küçük boyalı yüzeylere yayın, oda sıcaklığında doğal olarak kurumasını bekleyin veya uzaktan yavaşça kurutun.
2. Fiksasyonun amacı bakterileri öldürmek, bakteri proteinini ve yapısını pıhtılaştırmak ve lekelenmeyi kolaylaştırmaktır; yıkama sırasında suyla yıkanmasını önlemek için bakterilerin slayta yapışmasını teşvik edin; Bakterilerin boyalara karşı geçirgenliğini değiştirmek, bu da bakteri hücrelerinin lekelenmesinin yapısına faydalıdır. Genellikle alevle ısıtılarak sabitlenir ve kuruyan smear hızla 3 kez alevden geçirilir. Sürgüye değdiğinde elin arkasındaki deriyi yakmamak daha iyidir.
3. Boyama Farklı inceleme amaçlarına göre, boyama için farklı boyama yöntemleri seçin. Boyama yaparken, örtücülüğü artırmak için boya solüsyonunu damla damla ekleyin.
4. Mordan Boya ile boyanan cisim arasındaki afiniteyi artıran, boyayı boyanan cisim üzerine sabitleyen ve hücre zarının geçirgenliğini değiştiren her türlü maddeye mordan denir. Şap, tanik asit, metal tuzları ve iyot vb. yaygın olarak kullanılır ve renklendirmeyi desteklemek için ısıtma da kullanılır. Mordanlar birincil boyama ile karşıt boyama arasında kullanılabilir ve ayrıca fiksasyondan sonra kullanılabilir veya fiksatif ve boyamada bulunabilir.
5. Renk giderme Boyalı nesnenin rengini kaldırabilen herhangi bir kimyasal maddeye renk giderici denir. Etanol, aseton vb. yaygın olarak renk giderici olarak kullanılır. Renk giderici ajan, diferansiyel boyama için kullanılabilen bakteri ve boya kombinasyonunun stabilite derecesini tespit edebilir.
6. Karşı boyama Bakteriler veya renkleri giderilmiş yapıları, kolay gözlem için genellikle bir karşı boyama solüsyonuyla karşıt boyama yapılır. Karşı boyama solüsyonunun rengi, keskin bir kontrast oluşturmak için birincil boyama solüsyonundan farklıdır. Karşıt boyama, ilk boyamanın rengini örtmemek için çok güçlü olmamalıdır.
