Konfokal lazer mikroskobunun avantajları nelerdir?
Geleneksel geniş alan mikroskopları ile karşılaştırıldığında, lazer taramalı konfokal mikroskopi, yüksek tanım, yüksek çözünürlük ve yüksek hassasiyet özelliklerine sahiptir. Biyotıp alanında yaygın olarak kullanılmaktadır ve bu alanda önemli bir görüntüleme aracı haline gelmiştir. Konfokal neden bu kadar çok sevilebilir ve ne gibi avantajları vardır? Bu makale, konfokalın avantajlarını tartışmak için üç yönü listeler.
Yalnızca odak düzlemindeki sinyali toplayın, görüntüyü bulanıklıktan arındırın
Peki konfokal mikroskopi bu avantajı nasıl elde ediyor? Bunun nedeni, anahtar konfokal donanımdır - Şekil 2'de gösterildiği gibi iğne deliği. Bu, dedektörün önünde küçük bir deliktir ve numunenin odak düzlemine eşlenik optik düzlem üzerine yerleştirilmiştir. Uyarma ışığı numuneyi ışınladığında, numune alanının hem odak düzlemi hem de odak dışı düzlemi, floresan sinyalleri oluşturmak için uyarılacaktır, uygun iğne deliği boyutunu (genellikle 1 Au) ayarlayın, böylece floresan sinyali odak düzleminde (yeşil noktalı çizgi) odak düzleminden dedektöre ulaşmak için iğne deliğinden geçen Floresan sinyalleri (kırmızı ve mavi kesikli çizgiler) olabilir, iğne deliğinden dedektöre ulaşamaz. Donanım iğne deliklerinin eklenmesiyle konfokal, sıradan floresan mikroskopları yapma yöntemini değiştirmeden net ve yüksek kaliteli görüntüler elde edebilir.
İğne deliğinin varlığı nedeniyle, yalnızca odak düzlemindeki sinyali alabilir ve yüksek çözünürlüklü iki boyutlu bir görüntü elde edebiliriz. Z ekseni konumunu sürekli ayarlayarak, farklı Z ekseni konumlarında iki boyutlu görüntüler elde edilebilir ve bir dizi sürekli "optik dilim" görüntüsü elde edilebilir. Bu optik dilimler elde edildikten sonra, alet yazılımıyla donatılmış 3B modül, net bir 3B görüntü oluşturmak üzere 3B görüntüyü yeniden yapılandırmak için kullanılabilir. Optik dilim görüntülerinin bu tahribatsız, sürekli koleksiyonu, "hücre CT" işlevini gerçekleştirir.
Kolokalizasyon sonuçlarının doğruluğu, görüntünün çözünürlüğü ile yakından ilişkilidir, bu nedenle kolokalizasyon deneyleri yaparken daha yüksek çözünürlüklü bir görüntüleme yöntemi seçmemiz gerekir. Geleneksel mikroskoplarla karşılaştırıldığında, konfokal mikroskopi, yüksek çözünürlüklü avantajlarından dolayı kolokalizasyon araştırması için güçlü bir araç haline gelmiştir.
Kırınım sınırının varlığı nedeniyle, geleneksel konfokal optik çözünürlük 200nm civarındadır. 200nm'den daha büyük yapıları gözlemlememiz gerektiğinde, konfokal, kolokalizasyon derecesini doğru bir şekilde belirleyebilir. Kolokalizasyon analizi gerekiyorsa, konfokal yazılımla donatılmış kolokalizasyon analiz modülü seçilebilir.
