Floresan mikroskobunun prensibi ve yapısal özellikleri
Floresan mikroskobu, uyarma ışığı olarak renk filtre sistemi aracılığıyla belirli bir dalga boyuna sahip ışık (ultraviyole ışık 3650 veya mor-mavi ışık 4200 gibi) yaymak için yüksek ışık verimliliğine sahip bir nokta kullanır ve daha sonra numunedeki floresan maddeleri yaymak için uyarır. farklı renklerdeki floresansları algılar ve daha sonra bunları objektif merceğin ve göz merceğinin amplifikasyonu yoluyla gözlemler. Bu sayede güçlü kontrast arka plan altında floresans çok zayıf olsa bile tanımlanması kolay ve yüksek hassasiyete sahiptir. Esas olarak hücre yapısı ve fonksiyonu ile kimyasal bileşimin incelenmesi için kullanılır. Floresan mikroskobunun temel yapısı sıradan optik mikroskop ve bazı aksesuarlardan (floresan ışık kaynağı, uyarma filtresi, dikroik ışın ayırıcı ve engelleme filtresi vb.) oluşur. Floresan ışık kaynağı —— Genellikle çeşitli dalga boylarında ışık yayan ultra yüksek basınçlı cıva lambası (50-200W) kullanılır, ancak her floresan maddenin en güçlü floresansı üreten bir uyarma ışık dalga boyu vardır, bu nedenle Uyarma filtrelerinin (genellikle ultraviyole, mor, mavi ve yeşil uyarma filtreleri) eklenmesi gerekir, böylece numuneye yalnızca belirli bir uyarma ışığı dalga boyu iletilir ve diğer tüm ışıklar emilir. Her madde uyarma ışığıyla ışınlandıktan sonra çok kısa bir sürede ışınlama dalga boyundan daha uzun görünür floresans yayar. Floresansın özgüllüğü vardır ve bu genellikle uyarma ışığından daha zayıftır. Spesifik floresansın gözlemlenebilmesi için objektif merceğin arkasında bloke edilmesi (veya bastırılması) ve birlikte kullanılması gerekmektedir.
Floresan mikroskobu ile ortak mikroskop arasındaki fark
1. Aydınlatma modu genellikle epizodiktir, yani ışık kaynağı objektif mercek aracılığıyla numuneye yansıtılır;
2. Işık kaynağı, kısa dalga boyuna ve sıradan mikroskoptan daha yüksek çözünürlüğe sahip ultraviyole ışıktır;
3. İki özel filtre vardır, ışık kaynağının önündeki filtre görünür ışığı filtrelemek için kullanılır, mercek ile objektif merceği arasındaki filtre ise insanların gözlerini korumak için ultraviyole ışığı filtrelemek için kullanılır.
Floresan mikroskobu da bir tür optik mikroskoptur, temel fark, uyarılma dalga boylarının farklı olmasıdır. Bu, floresans mikroskobu ile sıradan optik mikroskop arasındaki yapı ve kullanım açısından farkı belirler.
Floresan mikroskobu immünofloresan sitokimyanın temel aracıdır. Işık kaynağı, filtre plakası sistemi ve optik sistemden oluşur. Numuneyi floresans yaymak üzere uyarmak için belirli bir dalga boyuna sahip ışık kullanır ve numunenin floresans görüntüsünü gözlemlemek için onu objektif lens ve göz merceği sistemi aracılığıyla büyütür.
