Mikrobiyal Miktarın Ölçümü - Mikroskobik Doğrudan Sayım Yöntemi!
Bakteri popülasyonlarının büyümesi, hücre sayısındaki artış veya hücresel materyaldeki artışla karakterize edilir. Hücre sayılarını ölçmek için, doğrudan mikroskobik sayım, plaka sayımı, spektrofotometre ile turbometri, en olası sayı MPN ve membran filtrasyonu dahil olmak üzere çeşitli yöntemler vardır. Hücresel maddeleri ölçmeye yönelik yöntemler arasında hücre kuru ağırlığının ölçülmesi, nitrojen, RNA ve DNA gibi hücrelerin belirli bileşenlerinin içeriğinin ölçülmesi ve metabolik ürünlerin ölçülmesi yer alır. Özetle, mikrobiyal büyümeyi ölçmek için her birinin kendine özgü avantajları ve dezavantajları olan birçok yöntem vardır ve seçim, çalışmadaki özel gereksinimlere dayanmalıdır. Bu deney esas olarak üretim ve bilimsel araştırma çalışmalarında yaygın olarak kullanılan mikroskop doğrudan sayma yöntemini tanıtmaktadır.
Amaç gereksinimleri
1. Sayım için kan hücresi sayma tahtası kullanma ilkesini açıklayın.
2. Mikrobiyal sayım için kan hücresi sayma tahtası kullanma yönteminde ustalaşın.
2, Temel İlkeler
Mikroskobik doğrudan sayma yöntemi, bir numunenin az miktardaki süspansiyonunu, belirli bir alana ve hacme sahip özel bir cam slayt (aynı zamanda bakteri sayacı olarak da bilinir) üzerine yerleştirerek mikroskop altında doğrudan saymanın basit, hızlı ve sezgisel bir yöntemidir. Şu anda yurt içinde ve yurt dışında yaygın olarak kullanılan bakteri sayma cihazları arasında kan hücresi sayma plakaları, Peteroff Hauser bakteri sayma cihazları ve Hawksley bakteri sayma cihazları yer almaktadır ve bunların tümü maya, bakteri, mantar sporları vb. süspansiyonlarını saymak için kullanılabilir. aynı temel prensiple. Son iki tür bakteri sayacı, bir kapak camıyla kaplandıktan sonra toplam {{{0}}.02mm3 hacme sahiptir ve kapak camı ile taşıyıcı slayt arasındaki mesafe yalnızca 0,02 mm'dir. Bu nedenle, bakteri gibi daha küçük hücreleri gözlemlemek ve saymak için bir yağa batırma hedefi kullanılabilir. Bu bakteri sayaçlarının kullanılmasının yanı sıra, genellikle sütün bakteriyolojik incelemesinde kullanılan, smear alanının tarla alanına oranının mikroskop altında doğrudan gözlemlenmesine yönelik bir tahmin yöntemi de bulunmaktadır. Mikroskopla doğrudan saymanın avantajları sezgisel, hızlı ve kullanımı kolaydır. Ancak bu yöntemin dezavantajı, ölçülen sonuçların genellikle ölü ve canlı hücrelerin toplamı olmasıdır. Şu anda bu dezavantajın üstesinden gelebilecek, canlı hücre boyama odası kültürünün birleştirilmesi (kısa süreli) ve yalnızca canlı hücrelerin sayılması hedefine ulaşmak için hücre bölünmesi inhibitörlerinin eklenmesi gibi bazı yöntemler vardır.
Mikroskop altında doğrudan saymaya örnek olarak kan hücresi sayma panosunun kullanılması. Diğer iki bakteri sayacının kullanım yöntemleri çeşitli üreticilerin kullanma kılavuzlarında mevcuttur. Kan hücresi sayma plakası kullanılarak mikroskop altında doğrudan sayım, mikrobiyal sayma için yaygın olarak kullanılan bir yöntemdir. Sayma tahtası, üzerinde üç platform oluşturan dört oyuk bulunan, özel olarak yapılmış bir cam slayttır; Ortadaki daha geniş platform, kısa yatay bir oyukla ikiye bölünmüştür ve platformun her iki yanında ızgaralar bulunmaktadır. Her ızgara dokuz büyük ızgaraya bölünmüştür ve ortadaki büyük ızgara sayım odasıdır. Kan hücresi sayma plakasının yapısı Şekil l{{0}}'de gösterilmektedir. Sayım odasının ölçeği genellikle iki özelliğe sahiptir. Birincisi, büyük bir karenin ortadaki 25 kareye bölünmesi ve her karenin ayrıca 16 küçük kareye bölünmesidir (Şekil 15-2); Diğer bir yöntem ise büyük bir kareyi ortadaki 16 kareye bölmektir ve her kare ayrıca 25 küçük kareye bölünür. Ancak sayma tahtasının boyutundan bağımsız olarak her büyük karede 400 küçük kare vardır. Her karenin kenar uzunluğu 1 mm ise her büyük karenin alanı lmm2 olur. Lamel ile kapatıldıktan sonra lamel ile slayt arasındaki yükseklik 0,1 mm olduğundan sayma odasının hacmi 0,1 mm3 (mililitrenin binde biri) olur. Şekil 15-1 Kan Hücresi Sayım Tablosunun Yapısı (I) Şekil 15-2 Kan Hücresi Sayım Tablosunun Yapısı (II) A Önden görünüm; B. Dikey kesit görünümü; Büyütülmüş ızgaranın ortasında sayım odası 1 olarak büyük bir kare bulunur. Kan hücresi sayma panosu; 2. Camı kapatın; Sayım odasında sayım yapılırken, toplam bakteri sayısı genellikle beş kare için hesaplanır, daha sonra her karenin ortalama değeri elde edilir, 25 veya 16 ile çarpılarak büyük bir karedeki toplam bakteri sayısı elde edilir ve bu daha sonra şuna dönüştürülür: lml bakteri çözeltisindeki toplam bakteri sayısı. Beş kare ızgaradaki toplam bakteri sayısının A ve bakteri solüsyonunun seyreltme faktörünün B olduğunu varsayarsak. Kare ızgarada 25 sayma plakası varsa 1 mL bakteri solüsyonundaki toplam bakteri sayısı A/5 × 25 × 104 olur. × B=50000A · B. Benzer şekilde, kare ızgarada 16 sayma plakası varsa, 1 mL bakteri çözeltisindeki toplam bakteri sayısı A/5 × 16 × 104 × B=32000A · B
