Uygun floresan mikroskobu nasıl seçilir
Floresan mikroskobu, laboratuvarlarda ve patoloji bölümlerinde gözlem ve görüntüleme için floresans özelliklerini kullanan standart bir mikroskobik görüntüleme ekipmanıdır. Hücre biyolojisi, nörobiyoloji, botanik, mikrobiyoloji, patoloji, genetik vb. gibi çeşitli alanlarda yaygın olarak kullanılmaktadır. Floresan görüntüleme, yüksek duyarlılık ve özgüllük avantajlarına sahiptir ve bu da onu belirli proteinlerin, organellerin vb. dağılımını gözlemlemek için çok uygun kılar. dokularda ve hücrelerde ortak lokalizasyon ve etkileşimlerin incelenmesi, iyon konsantrasyonu değişiklikleri gibi yaşam dinamik süreçlerinin izlenmesi vb.
Mikroskop seçimi
Floresan mikroskoplar temel olarak üç kategoriye ayrılır: dik floresans mikroskopları (dilimleme için uygundur), ters floresans mikroskopları (canlı hücreler için ve ayrıca dilimleme için uygundur) ve stereo floresans mikroskopları (bitkiler, zebra balığı (yetişkin/yetişkin) gibi daha büyük örnekler için uygundur) embriyonik), medaka, fare/sıçan organları vb.).
Floresan filtre bloklarının seçimi
Filtre bloklarının seçiminde yalnızca floresan probların uyarılma ve emisyon dalga boyları dikkate alınmamalı, aynı zamanda spesifik olmayan uyarılma olup olmadığı ve çok renkli etiketli numuneler için renk karışması olup olmadığı da dikkate alınmalıdır. Deneyde, uyarılma için mümkün olduğu kadar uyarılma zirvesine en yakın dalga boyunu seçeceğiz ve alım aralığı, emisyon zirvesini içermelidir. Alexa Fluor 488'in uyarılma zirvesi 500 nm'dir ve bir floresan mikroskobunda 480/40 uyarma filtresi seçilebilir. Floresan mikroskobunda yaygın olarak kullanılan floresan filtre blokları iki türe ayrılabilir: uzun geçişli (LP) ve bant geçişli (BP), bunların da ihtiyaçlara göre seçilmesi gerekir.
Konfokal mikroskop
Geleneksel floresan mikroskobu gözlemlerinde, floresan etiketli maddeler ve kendiliğinden floresans yapılarının örtüşmesi nedeniyle bunlar birbirine sıkı bir şekilde bağlanır. Bununla birlikte, geleneksel düşen floresan mikroskopi hedefleri yalnızca odak düzleminden ışık toplamakla kalmaz, aynı zamanda ışığı odak düzleminde yukarı ve aşağı dağıtarak görüntü çözünürlüğünde ve kontrastta önemli bir azalmaya neden olur.
Eş odaklı görüntüleme yalnızca kendi kendine odaklanan düzlemden yansıyan ışığı algılar ve böylece yukarıdaki sorunu çözer. Işık kaynağı, bir iğne deliğinden geçerek odak düzleminde küçük ve ince bir nokta oluşturur ve odak düzleminden yayılan ışık, objektif merceği aracılığıyla toplanır. Objektif merceğin odak düzleminin üstündeki veya altındaki noktalardan yayılan floresansın çoğunluğu iğne deliğine yaklaşamaz. Yalnızca odak düzleminde yer alan floresans ve odaklanmamış floresansın küçük bir kısmı iğne deliğinden geçebilir, odak düzleminin dışındaki ışık huzmesi iğne deliği plakasının önünde veya arkasında birleşir ve iğne deliğinden dedektöre girmesi engellenir. Algılanan görüntü odak düzleminden olduğundan son görüntü kalitesi büyük ölçüde iyileştirilir.
Lazer taramalı konfokal mikroskopinin çeşitli avantajları ve pratikliği nedeniyle, şu anda yüksek hassasiyetli hücre biyolojisi, botanik ve hücre araştırma alanlarında vazgeçilmez bir deney asistanıdır. Aynı zamanda geleceğin bilimsel araştırma merkezlerinde de en temel ve temel araştırma aracı olacaktır.
