Sizin için doğru konfokal mikroskobu nasıl seçersiniz? Belirli bir yöntem var mı?
Konfokal mikroskopinin geniş alan mikroskopisinden daha fazla avantajı vardır. Konfokal mikroskopi, numunelerin sürekli optik bölümlemesini yapabilir ve odak dışı düzlemlerden gelen sinyal girişimini hariç tutabilir. Bu nedenle, konfokal mikroskopi uygulaması gerçekten daha yaygındır. Bununla birlikte, piyasada giderek daha fazla konfokal mikroskop bulunmaktadır. Nasıl seçilir?
Konfokal mikroskopinin geniş alan mikroskopisinden daha fazla avantajı vardır. Konfokal mikroskopi, numunelerin sürekli optik bölümlerini oluşturabilir ve odak dışı düzlemlerden gelen sinyal girişimini hariç tutabilir. Bu nedenle, konfokal mikroskopi gerçekten daha yaygındır. Bununla birlikte, piyasada giderek daha fazla konfokal mikroskop bulunmaktadır. Nasıl seçilir? Bir konfokal mikroskop seçerken, iki temel ve önemli husus vardır: incelemek istediğiniz örneğin türü (örn. sabit veya canlı hücreler) ve gerçekleştirmek istediğiniz testin tipi (örn. statik veya dinamik hücresel süreçler).
Sabit hücrelerin konfokal görüntülemesi
Sabit ve lekeli hücreleri veya dokuları görüntülemek için genellikle lazer taramalı konfokal (LSCM) seçiyoruz. Bunun başlıca nedeni, sabit ölü hücrelerin canlı hücrelerdeki hızlı biyolojik olaylara sahip olmaması ve LSCM'nin daha yüksek uzamsal çözünürlüğünden daha iyi yararlanabilmesidir. LSCM görüntüleme, numuneyi lazerle optik olarak dilimlemek içindir ve tarama hızı (tarama dizisi aynasının hızına bağlı olarak) genellikle 1 fps'dir. Daha uzun maruz kalma süreleri, daha fazla ışıkla ağartma riski anlamına gelir, ancak sabit ölü hücreler için süre kritik değildir ve birden fazla fotoğraf çekerek ortalamasını alabiliriz.
Canlı hücrelerin konfokal görüntülemesi
Canlı hücrelerin görüntülenmesi, düşmanca ortamlardan ek koruma gerektirir. Görüntüleme yaparken, ilk düşüncemiz hücre canlılığını ve sağlığını korumaktır. Sabit sıcaklıktaki ısıtma elemanları ve perfüzyon sistemleri, özellikle hızlandırılmış çalışmalar için gereklidir. Canlı hücrelerin fizyolojik durumunu kontrol eden hızlı biyokimyasal olaylar çoğu insanın çalışmak istediği şeylerdir, ancak bu olaylar geleneksel LSCM için çok hızlıdır. Ek olarak, LSCM'ye uzun süre maruz kalmak da hücrelerde toksik ışık hasarına neden oldu. Bu nedenle, canlı hücrelerin görüntülenmesi özel konfokal mikroskoplar gerektirir.
Canlı hücrelerin konfokal görüntülenmesi için genellikle iki seçenek vardır: hızlı tarama lazer tarama konfokalleri ve dönen disk konfokalleri. Hızlı taramalı konfokal mikroskopi, daha yavaş galvanometre aynalarını daha hızlı rezonant tarama aynalarıyla değiştirerek 30 fps'ye kadar tarama hızları sağlar; dönen disk konfokalleri (SDCM'ler) daha hızlı tarama avantajına sahipken (kaçınılmaz olarak bir Uzamsal çözünürlük kaybına rağmen), hızı teorik olarak 2000 fps'ye ulaşabilir (pratikte genellikle diğer faktörler tarafından sınırlandırılır).
Işıkla ağartma veya çok zayıf floresan sinyali konusunda endişeleriniz varsa SDCM daha uygun olabilir. SDCM, uyarım ışığını dağıtmak için dizili mikrokuyucuklara sahip iki dönen disk kullanır. Örnek noktayı tarayan LSCM'den farklı olarak, SDCM aynı anda birden fazla nokta (yaklaşık 100 piksel nokta) alır, bu nedenle hız büyük ölçüde artar ve SDCM'nin ışıkla ağartması ve daha az fototoksisite. Bununla birlikte, tarama hızını artırmak için son derece hassas dedektörlerle birlikte hızlı tarama konfokallerini de kullanabilir ve geleneksel konfokallerin zengin işlevlerini koruyabilen fototoksisiteyi azaltmak için uyarma ışık enerjisini azaltabilirsiniz.
Otomatik konfokal görüntüleme sistemi
Bazı araştırmacılar, mikroskobu kendi bireysel ihtiyaçlarına göre değiştirmenin yollarını bulmayı sever. Ve bazı araştırmacılar mikroskopların gerçekte nasıl çalıştığıyla ilgilenmiyor bile. İkincisi için, otomatik bir konfokal mikroskop onların beğenisine göre daha fazla olabilir. Örneğin, Olympus FluoViewFV10i tam otomatik bir masaüstü 4-lazer konfokal mikroskoptur. Kompakt entegre yapısı neredeyse hiç kurulum alanı gerektirmez. Bu tür bir araç, her gün çok sayıda görüntü verisi elde etmesi gereken araştırmacılar için idealdir, ancak elbette geleneksel konfokallerin işlevselliğini ve esnekliğini tam olarak yansıtmazlar. Ayrıca NikonA1 tam otomatik bir konfokal sistemdir. Çoğu geleneksel eş odaklı tarama mikroskobu gibi, NikonA1 de hibrit tarama kafasına sahip A1R'den daha yüksek çözünürlüğe sahip ancak biraz daha yavaş bir hıza (A1R ~30 fps) sahip bir galvanometre tarama kafası kullanır.
