Doku Bloklarının Hacmine İlişkin Biyomikroskopi
Biyolojik Mikroskopi Şimdiye kadar, soğuk fiksasyon, donmuş ultra ince kesit ve dondurarak kurutma, doku ve hücre x-ışını mikro kesitleri için rutin yöntemlerdir. Bu yöntemin detayları şu şekilde açıklanmaktadır:
Kondansatörlü biyolojik mikroskoplar için, kondansatör parlaklığı ılımlı hale getirmek için yukarı ve aşağı hareket ettirilebilir ve değişken ışığın açıklığı da ılımlı bir 9b parlaklık elde etmek için değiştirilebilir. Işık güneşliyse, kondansatör uygun şekilde yükseltilebilir ve değişken ışık kaynağının açıklığı uygun şekilde genişletilebilir. Işık çok güçlüyse, yoğunlaştırıcı mercek uygun şekilde alçaltılabilir ve kesişen ışığın açıklığı uygun şekilde azaltılabilir. Bu durumda yine de göz kamaştırıcı hissediyorsanız uygun bir filtre seçip kondansatörün altındaki brakete yerleştirebilirsiniz. Bu meşe sizi tatmin eden parlaklığı elde edebilecektir. Elbette kondansatörün üst ve alt konumlarını ayarlamak, değişken optik okumanın açıklık boyutunu ayarlamak ve uygun bir filtre seçmek deneyim kazanmak için belirli bir süre pratik gerektirir.
Biyolojik mikroskopide çok önemli bir konu, hücrelerin numune alma ve ayırma sürecinde, dondurarak kurutma ve reçine gömme (FD) sonrasında, ultra-ince agregaların dondurulmasından sonra ve dondurarak kurutma sonrasında, her bir kısımda 65 element içeriğinin olmasıdır. dikkatle ele alınmalıdır. Analiz edilecek hücreler zarar görmez. Çünkü X-ışınları mikroanalizi sadece birçok adım içermekle kalmaz, aynı zamanda çok maliyetlidir. Analiz edilen hücreler, uzun bir süre ve çok adımlı işlemden sonra hasarlı hücreler veya ölü hücreler ise, yanlış sonuçlara varmak çok üzücü. Örneğin, kollajenaz işlemi ile ayrılan kardiyomiyositler, biri uzun çubuk olmak üzere iki forma sahiptir.
Biyomikroskopi Bu iki hücre tipindeki elektrolitlerin miktarı ve dağılımı oldukça farklıdır. Dairesel kardiyomiyositlerde Na çok yüksek ve K çok düşüktür ve nematodlarda Ca konsantrasyonu çok yüksektir. Diğer analiz yöntemleri ile kontrol edildikten sonra, yuvarlak hücrelerin yüksek Na ve düşük K ve mitokondrilerdeki yüksek Ca'nın hücre ayırma işlemi sırasında hücre zarının zarar görmesinden kaynaklandığı kanıtlanmıştır. Hücrelerin ve dokuların buz gibi soğuk fiksasyon yöntemi genellikle önce söndürme ve fiksasyonu benimsemek ve ardından bunları sıvı nitrojende depolamaktır. Söndürme fiksasyonu, korumanın etkisi için çok önemlidir. Canlı hücreler veya taze dokular su açısından zengindir. Söndürme sırasında, hücrelerin veya dokuların ezilmiş soğutucu akışkanla doğrudan temas halinde olan kısımları (özellikle sıvı nitrojen ile söndürme sırasında) genellikle önce dondurulur ve sabitlenir, böylece hücrelerin merkezi kısımlarının ezilmiş ve soğukta sabitlenmiştir. Bu nedenle, X-çizgisi mikro alan analizi yapılırken, genellikle daha büyük hücrelerin merkezinde buz kristallerinin olduğu bulunur. Bunun olmasını önlemek için, kırık soğutucu olarak sıvı nitrojenden daha yüksek ancak 806c'den daha düşük bir erime noktasına sahip bir madde kullanılır. Bu tür birçok madde vardır, ancak elde edilmesi en kolay olanı, en ucuzu konsantre propandır (kaynama noktası - 42.120c, erime noktası - 187.10c, molekül ağırlığı 44.1) ve soğutma hızı en hızlıdır . Ancak dezavantajı yanıcı olmasıdır.
Biyolojik mikroskop, kas lifini özel bir rafa koyabilir, böylece kas lifi kasılması belirli bir aşamaya ulaştığında ve sabitlenmesi gerektiğinde, hemen söndürmek ve düzeltmek için kas lifine sıvı propan püskürtmek için memeyi başlatın. Daha sonra çerçeve ile birlikte kas lifleri çıkarıldı ve sıvı nitrojene kondu. Kan hücrelerini veya izole edilmiş hücreleri sabitliyorsanız, önce hücreleri düşük hızda santrifüjleyerek konsantre edin, hücreleri iyi termal iletkenliğe sahip gümüş bir şişeye aktarın, şişeyi sıvı propan içine yerleştirin ve sabitleme için dondurun. Sıçan pankreasını Hall laboratuvarında sabitlerken, iki çelik blok sıvı helyum (veya sıvı nitrojen) ile önceden soğutuldu ve iki bakır blok kıskaçla kenetlendi ve pankreasın önüne ve arkasına yerleştirilerek söndürüldü ve sabitlendi pankreas Dokular veya hücreler, söndürüldükten ve sabitlendikten sonra uzun süreli depolama için sıvı nitrojende saklanabilir.
Biyolojik Mikroskopi Şu anda en saygın donmuş ultra ince kesit yöntemine ek olarak, burada bilim adamları tarafından kullanılan başka bir biriktirme tekniği var. Analizden önce onu hareketsiz hale getirmek için analiz edilecek bileşenle bir tortu oluşturmak üzere bir madde eklenir ve ardından tortu analiz edilir. Örneğin, insanlar kas hücrelerinde Ca biriktirmek için sıklıkla oksalat ve piroantimonat kullanırlar. İlki, sitoplazmada düşük Ca konsantrasyonuna yeterince duyarlı değildir; piroantimonat daha hassastır ve beyinde serbest Ca ile elektron yoğun birikintiler oluşturabilir, ancak piroantimonat sodyum, manganez, baryum, demir ile uyumlu değildir. Tortular da oluşur ve daha az spesifiktir. Numune hazırlama işlemi, sıradan transmisyon elektron mikroskobu ultra ince kesit numunelerinin hazırlanmasına benzer, fark, yüzde 3 potasyum piroantimonatın (fosfat tampon salin, pH 7.6) fiksasyondan önce 6 saat boyunca sabitlenmesi ve lekeli kas ultra ince kesitlerinde, Her bir sarkomerin A ve 2 bandının orta hatlarında siyah birikintiler görüldü ve X-ışını mikro analizi için boyanmamış bölümler kullanıldı. Hem içeren maddeleri çökeltmek için diaminobenzidin tetrahidroklorür (DAB) kullanıldı vb. Histokimyasal çökeltme reaksiyonu ve x-ışını mikro farklılaşma köprüsünün kombinasyonu, donmuş ultra ince kesit koşullarına sahip olmayan laboratuvarlarda düşünülebilir. Analiz edilecek elementlerin pik yüksekliklerine göre yarı kantitatif yapılabilir.
