Lazer Taramalı Multifoton Mikroskopların Gelişmiş Faydaları
Lazer taramalı multifoton mikroskobu, optik mikroskopide önemli bir gelişmedir; temel olarak canlı hücrelerin, sabit hücrelerin ve dokuların derin yapılarını gözlemleme ve örneklerin üç{{2} boyutlu katı yapılarını oluşturmak için kullanılabilen net ve keskin çok-katmanlı Z{-düzlem yapıları, yani optik dilimler elde etme yeteneğinde kendini gösterir. Konfokal mikroskop, objektif merceğin tüm odak düzlemini dolduracak şekilde genişletilen ve daha sonra objektif merceğin mercek sistemi aracılığıyla numunenin odak düzlemi üzerinde çok küçük noktalara birleştirilen bir lazer ışık kaynağı kullanır. Objektif merceğin sayısal açıklığına göre, en parlak aydınlatma noktasının çapı yaklaşık 0,25-0,8 μ m, derinliği ise yaklaşık 0,5-1,5 μ m'dir. Konfokal noktanın boyutu mikroskop tasarımı, lazer dalga boyu, objektif özellikler, tarama ünitesi durum ayarları ve numune özelliklerine göre belirlenir. Bir alan mikroskobunun aydınlatma aralığı ve derinliği genişken, eş odaklı bir mikroskobun aydınlatması, odak düzlemindeki güvenli bir odak noktasına odaklanır. Konfokal mikroskopinin en temel avantajı, kalınlığı yaklaşık 0,5 ila 1,5 μm olan kalın floresan numuneler (50 μm veya daha fazla) üzerinde ince optik kesitler alabilmesidir. Optik dilim görüntüleri serisi, mikroskobun Z-ekseni adım motorunu kullanarak numuneyi yukarı ve aşağı hareket ettirerek elde edilebilir. Görüntü bilgilerinin toplanması güvenli bir düzlemde kontrol edilir ve numunenin diğer konumlarından yayılan sinyaller tarafından etkilenmez. Arka plan floresansının etkisi kaldırıldıktan ve sinyal-gürültü oranı artırıldıktan sonra, konfokal görüntülerin kontrastı ve çözünürlüğü, geleneksel alan aydınlatmalı floresan görüntülerine kıyasla önemli ölçüde iyileştirilir. Pek çok örnekte, karmaşık yapısal bileşenler karmaşık sistemler oluşturmak için iç içe geçer, ancak yeterli sayıda optik bölüm toplandıktan sonra bunları üç boyutlu olarak yeniden oluşturmak için yazılım kullanabiliriz. Bu deneysel yöntem, biyolojik araştırmalarda hücreler veya dokular arasındaki karmaşık yapısal ve fonksiyonel ilişkileri açıklamak için yaygın olarak kullanılmaktadır.
