Neden bir konfokal mikroskoba ihtiyacınız var?
1. Büyük atalarımızın çabaları ve iyileştirmelerinden sonra, optik mikroskop mükemmellik noktasına ulaştı. Aslında, sıradan mikroskoplar bize güzel mikroskobik görüntüleri basit ve hızlı bir şekilde sağlayabilir. Bununla birlikte, bu neredeyse mükemmel mikroskop dünyasına devrim niteliğinde bir yenilik getiren bir olay oldu, bu da "lazer taramalı konfokal mikroskop" un icadıydı. Bu yeni tip mikroskobun özelliği, yalnızca odağın yoğunlaştığı yüzeydeki görüntü bilgilerini çıkaran ve odak değiştirilirken elde edilen bilgileri görüntü belleğine geri yükleyen bir optik sistemi benimsemesidir, böylece tam 3B bilgi elde edilebilir. Elde edilen. Zekanın keskin bir görüntüsü. Bu yöntemle yüzey şekli hakkında normal bir mikroskopla doğrulanamayan bilgileri kolaylıkla elde etmek mümkündür. Ayrıca sıradan optik mikroskoplar için "artan çözünürlük" ve "odak derinliğinin derinleşmesi" çelişkili durumlardır, özellikle yüksek büyütmelerde bu çelişki daha belirgindir, ancak konfokal mikroskoplar açısından bu sorun kolayca çözülür.
2. Konfokal optik sistemin avantajları
Konfokal optik sistem, numune üzerinde nokta aydınlatması gerçekleştirir ve yansıyan ışık da nokta reseptörü tarafından alınır. Numune odak konumuna getirildiğinde, yansıyan ışığın neredeyse tamamı fotoreseptöre ulaşabilir ve numune odak dışı olduğunda yansıyan ışık fotoreseptöre ulaşamaz. Yani konfokal optik sistemde sadece odak noktası ile çakışan görüntü çıkarılacak ve ışık noktaları ve gereksiz saçılan ışık perdelenecektir.
3. Neden lazer kullanıyorsunuz?
Konfokal optik sistemde numune bir noktada aydınlatılır ve yansıyan ışık da bir nokta fotoreseptör tarafından alınır. Bu nedenle, bir nokta ışık kaynağı gerekli hale gelir. Lazerler çok noktasal ışık kaynaklarıdır. Çoğu durumda, lazer ışık kaynakları, konfokal mikroskoplar için ışık kaynakları olarak kullanılır. Ek olarak, lazerin tek renklilik, yönlülük ve mükemmel ışın şekli özellikleri de yaygın olarak benimsenmesinin önemli nedenleridir.
4. Yüksek hızlı taramaya dayalı gerçek zamanlı gözlem mümkün hale gelir
Lazer tarama için, yatay yön Akustik Optik Saptırıcıyı (AO elemanı) benimser ve dikey yön servo elektronik olarak kontrol edilen ışın tarama aynasını (Servo Galvano-mirror) kullanır. Akusto-optik saptırma ünitesinde mekanik vibrasyon parçası bulunmadığından yüksek hızlı tarama yapabilmekte ve monitör ekranında gerçek zamanlı gözlem yapılabilmektedir. Bu yüksek hızlı görüntüleme, odaklama ve konum alma hızını doğrudan etkileyen çok önemli bir öğedir.
5. Odak konumu ve parlaklık arasındaki ilişki
Konfokal optik sistemde, numune doğru bir şekilde odak konumuna yerleştirildiğinde numunenin parlaklığı maksimumdur ve parlaklığı ondan önce ve sonra keskin bir şekilde azalır (Şekil 4'teki düz çizgi). Odak düzleminin hassas seçiciliği aynı zamanda konfokal mikroskop yükseklik yönü belirleme ve odak derinliği genişletme ilkesidir. Buna karşılık, sıradan optik mikroskoplarda odak konumundan önce ve sonra belirgin parlaklık değişiklikleri olmaz.
6. Yüksek kontrast, yüksek çözünürlük
Sıradan optik mikroskoplarda, yansıyan ışığın odak kısmından girişimi nedeniyle, odak görüntüleme kısmı ile örtüşerek görüntü kontrastında bir azalmaya neden olur. Konfokal optik sistemde ise odak noktasının dışına saçılan ışık ve objektif merceğin içindeki saçılan ışık neredeyse tamamen ortadan kaldırılır, böylece çok yüksek kontrastlı bir görüntü elde edilebilir. Ek olarak, ışık objektif merceğinden iki kez geçtiği için önce nokta görüntüsü keskinleştirilir, bu da mikroskobun çözme gücünü artırır.
7. Optik yerelleştirme işlevi
Eş odaklı optik sistemde, odak noktası ile çakışan nokta dışındaki yansıyan ışık, mikro gözenek tarafından korunur. Bu nedenle, üç boyutlu bir numuneyi gözlemlerken, numune odak düzlemi ile dilimlenmiş gibi bir görüntü oluşur. Bu etki, optik lokalizasyon olarak bilinir ve konfokal optik sistemlerin özelliklerinden biridir.
8. Mobil hafıza işlevine odaklanın
Odak noktasının dışındaki sözde yansıyan ışık, mikro gözenekler tarafından korunur. Öte yandan eş odaklı optik sistemin görüntü üzerinde oluşturduğu tüm noktaların odak noktası ile çakıştığı düşünülebilir. Bu nedenle, üç boyutlu örnek Z ekseni (optik eksen) boyunca hareket ettirilirse, görüntüler biriktirilir ve bellekte saklanır ve sonunda tüm örnek ve odak noktası tarafından oluşturulan görüntü elde edilir. Odak derinliğini bu şekilde sonsuz derinleştirme işlevine mobil belleğin işlevi denir.
9. Yüzey şekli ölçüm fonksiyonu
Odak kaydırma fonksiyonu açısından, numunenin yüzey şekli, bir yüzey yüksekliği kayıt devresi eklenerek temassız olarak ölçülebilir. Bu fonksiyona bağlı olarak her bir pikseldeki maksimum parlaklık değerinin oluşturduğu Z ekseni koordinatlarını kaydetmek mümkündür ve bu bilgilere dayanarak numune yüzeyinin şekli ile ilgili bilgi elde edilebilir.
10. Yüksek hassasiyetli mikro boyutlu ölçüm işlevi
Işık alma birimi, 1-boyutlu bir CCD görüntüleme sensörü kullanır, bu nedenle tarama cihazının tarama eğiminden etkilenmez, böylece yüksek hassasiyetli ölçüm tamamlanabilir. Ayrıca, ayarlanabilir odak derinliği (derinleştirme) ile odak kaydırma hafıza fonksiyonunun kullanılması nedeniyle, odak kaymasından kaynaklanan ölçüm hatası ortadan kaldırılabilir.
11. Üç boyutlu görüntü analizi
Yüzey şekli ölçüm işlevini kullanarak, numune yüzeyinin üç boyutlu görüntüsünü kolayca oluşturabilirsiniz. Sadece bu değil, aynı zamanda yüzey pürüzlülüğü ölçümü, alan, hacim, yüzey alanı, dairesellik, yarıçap, maksimum uzunluk, çevre, ağırlık merkezi, tomografik görüntü, FFT dönüşümü, çizgi genişliği ölçümü gibi çeşitli analizler de yapabilir. .
Lazer konfokal tarama mikroskobu sadece hücre morfolojisini gözlemlemek için değil, aynı zamanda hücre içi biyokimyasal bileşenlerin kantitatif analizi, optik yoğunluk istatistikleri ve hücre morfolojisinin ölçümü için de kullanılabilir.
