Ters floresans mikroskobunun doğru kullanımı
Ters floresans mikroskobu, üst düzey biyolojik bilim araştırmaları alanında kullanılan çok işlevli bir mikroskoptur. Yapısı karmaşık ve pahalıdır. Bu nedenle, tıp lisansüstü öğrencilerinin ters floresans mikroskobunun çalışma ve kullanım standartlarını doğru bir şekilde öğrenebilmeleri için, öğretmenlerin ters floresan mikroskobunun gerçek çalışmasını göstermeden önce ters floresan mikroskobunun temel bilgilerini öğretmeleri gerekir. Ters floresans mikroskobunun yapısını, ilkesini, işlevini ve temel kullanım yöntemlerini tanıtmalı ve daha sonra özel kullanım operasyonlarında farklı numuneler için farklı işlevler göstermeli, ters floresan mikroskobunun çalışmasını ve kullanımını kademeli olarak tıp lisansüstü öğrencileri için standart hale getirmelidirler.
1. Görsel gözlemin doğru kullanımı. Ters floresans mikroskobunun işlevlerinden biri parlak bir görüş alanında gözlem yapmaktır. Temel prensibi, ışıkla aydınlatıldıktan sonra numunenin her bir parçasının farklı ışık emilimine dayalı olarak parlak bir arka planda görüntüleme elde etmektir. Esas olarak lekeli veya renkli hücreleri, doku dilimlerini ve diğer örnekleri gözlemlemek için uygundur.
2. Diferansiyel gözlemin doğru kullanımı. Ters floresans mikroskobunun ikinci işlevi faz farkının gözlemlenmesidir. Temel prensibi, numunenin farklı bölümlerinin optik yol farkını genlik farkına dönüştürmek ve bir faz plakası ve dairesel açıklığa sahip bir spot ışığı ile bir faz farkı objektifi aracılığıyla gözlemlemektir. Esas olarak canlı hücreleri veya lekesiz doku dilimlerini gözlemlemek için uygundur. Deneysel öğretim sürecinde, tıp fakültesi lisansüstü öğrencilerine faz farkı gözleminin temel çalışma yöntemlerini takip etmeleri konusunda doğru rehberlik yapmanın yanı sıra, faz farkı gözlemini kullanarak örnekleri anlamaları ve ustalaşmaları konusunda onlara rehberlik etmek daha önemlidir. Onlar için gelecekteki bilimsel araştırmalarda en sık kullanılan yöntem, kültürlenmiş hücrelerin mikroskobik olarak gözlemlenmesidir. Öncelikle hücre ekipmanı seçimi için genellikle cam ve plastik malzemelerden yapılmış kültür kapları, tabaklar ve şişelerin kullanılması tavsiye edilir. Çoğunlukla renksiz ve şeffaftırlar ve hücre sıvısını dökmeye veya başka işlemlere gerek kalmadan ters floresans mikroskobu altında doğrudan gözlemlenebilirler. İkinci olarak, mikroskobik gözlem sırasında hücrelerin kirlenmesini önlemek için ekipmanın kapağını gelişigüzel açmayın. Son olarak operatörlerin yalnızca kendi sağlıklarını korumak için değil aynı zamanda hücre kontaminasyonunu önlemek için eldiven, maske ve beyaz önlük giymeleri gerekmektedir.
3. Floresans gözleminin doğru kullanımı. Ters bir floresans mikroskobunun üçüncü işlevi, floresans gözlemidir. Temel prensibi, floresans üretmek üzere numuneyi uyarmak için uyarma ışığını kullanmak, böylece numunenin şeklini ve konumunu gözlemlemektir. Esas olarak floresans etiketli numunelerin gözlemlenmesi için uygundur. Floresans gözlemi, pahalı aksesuarları ve özel kullanımı nedeniyle ters floresans mikroskobunun önemli bir işlevidir. Tıp lisansüstü öğrencilerinin floresans gözleminin çalışma normlarını doğru bir şekilde öğrenmeleri için, öğretmenler onlara yalnızca temel çalışma yöntemlerini öğretmekle kalmaz, daha da önemlisi onlara bunun benzersizliğini de öğretir. Öncelikle numune hazırlamada slayt ve kapak camının yüzeyi düzgün ve kalınlığı uygun olmalıdır (slayt 0.8mm ile 1.2mm arasında olmalı ve kapak camı {{5) civarında olmalıdır. }}.17mm); Numune, hücre örtüşmesini veya safsızlık maskelemesini önleyerek uygun bir kalınlığa sahip olmalıdır; Sızdırmazlık maddesi eşit miktarda gliserol ve karbonat tamponu karışımı kullanmalıdır (0.5mol/L pH 9.0-9.5). İkinci olarak, floresans gözlemi öncesinde odadaki ışıklar ve ters floresans mikroskobunun beyaz ışığı kapatılarak karanlık oda ortamında olduklarından emin olunmalıdır. Son olarak, floresans gözleminde gözlem süresi, genellikle 1-2 saat/saat olacak şekilde sıkı bir şekilde kontrol edilmelidir, aksi takdirde floresans bozulur ve kaybolur; Işık kaynağını ayarlarken UV ışınlarının camlara zarar vermesini önlemek için koruyucu gözlük takılmalıdır.
4. Görüntü yakalamanın doğru kullanımı. Bilimsel araştırmalarda, yalnızca ters floresan mikroskobunun birden fazla gözlem elde edebilmesi gerekli değildir, aynı zamanda ters floresan mikroskobunun görüntü yakalamayı başarabilmesi de gereklidir. Ters floresans mikroskop sistemi, optik mikroskobu fotoelektrik dönüşüm yoluyla bir bilgisayarla birleştirerek yalnızca mercek üzerinde mikroskobik gözleme değil, aynı zamanda gerçek zamanlı dinamik görüntü gözlemine, düzenlemeye ve bilgisayarda depolamaya da olanak tanır.
