Elektron Mikroskopları İçin Biyolojik Örneklerin Hazırlanması ve İncelenmesi
Mikroskobun çözünürlüğü kullanılan ışığın dalga boyuna bağlıdır. 1933 yılında ortaya çıkan elektron mikroskobu, ışık kaynağı olarak görünür ışıktan çok daha kısa dalga boylarına sahip elektron ışınlarının kullanılması nedeniyle optik mikroskoptan önemli ölçüde daha yüksek çözünürlük elde etti. Farklı ışık kaynakları aynı zamanda elektron mikroskopları ile optik mikroskoplar arasındaki bir dizi farklılığı da belirler.
Elektron ışını görüntüleme ilkelerindeki farklılıklara ve numuneler üzerindeki etkilerine dayanarak, modern elektron mikroskopları birçok türe ayrılmıştır. Şu anda en yaygın kullanılanlar transmisyon elektron mikroskopları ve taramalı elektron mikroskoplarıdır. Birincisi 1000-10000000 kat arasında değişebilen bir toplam büyütmeye sahipken, ikincisi 20-300000 kat arasında değişebilen bir toplam büyütmeye sahiptir. Bu deney temel olarak iki tip mikroskop örneğinin, transmisyon elektron mikroskobu ve taramalı elektron mikroskobunun hazırlanmasını tanıtmaktadır.
2, Ekipman
1. Escherichia coli suşu eğimlidir.
2. Çözelti veya reaktif: pentil asetat, konsantre sülfürik asit, susuz etanol, steril su, %2 sodyum fosfotungstat (pH 6,5-8,0) sulu çözelti, %0,3 polivinil formaldehit (kloroformda çözünmüş) çözelti, sitokrom c, amonyum asetat, plazmit pBR322.
3. Aletler veya diğer araçlar arasında sıradan optik mikroskoplar, bakır ağlar, porselen huniler, beherler, petri kapları, steril damlalıklar, steril cımbız, iğneler, cam slaytlar, sayma plakaları, vakumlu kaplama makineleri, kritik nokta kurutucuları vb. yer alır.
3, Operasyon adımları
(1) Transmisyon Elektron Mikroskobu için Örneklerin Hazırlanması ve Gözlenmesi
1. Metal ağın işlenmesi
Optik mikroskop örneği, gözlem için bir cam slayt üzerine yerleştirilir. Bununla birlikte, bir iletim aynasında, elektronlar cam tabakaya nüfuz edemediğinden, taşıyıcı olarak yalnızca bir ağ malzemesi kullanılabilir; bu malzemeye genellikle taşıyıcı ağ adı verilir. Taşıyıcı ağ, farklı malzeme ve şekillere bağlı olarak çeşitli spesifikasyonlara ayrılabilir; bunların arasında 200-400 ağ (delik sayısı) olan bakır ağ yaygın olarak kullanılır. Bakır ağ, herhangi bir kiri temizlemek ve temiz tutmak için kullanımdan önce işlemden geçirilmelidir, aksi takdirde destekleyici filmin kalitesi ve numune fotoğraflarının netliği etkilenir. Bu deneyde kullanılan 400 gözenekli bakır ağ aşağıdaki yöntemle işlenebilir: ilk olarak pentil asetatla ıslatın ve birkaç saat boyunca yüzdürün, ardından birkaç kez damıtılmış suyla durulayın ve son olarak bakır ağı dehidrasyon için susuz etanole daldırın ve yüzdürün. Yukarıdaki yöntemlerden sonra bakır ağ hala temiz değilse, seyreltilmiş konsantre sülfürik asitte (1:1) 1-2 dakika bekletilebilir veya %1 NaOH çözeltisinde birkaç dakika kaynatılabilir, birkaç kez damıtılmış suyla durulanabilir ve daha sonra daha sonra kullanmak üzere susuz etanolde dehidre edilebilir.
