Lazer Taramalı Multifoton Mikroskobunun Geliştirilmiş Avantajları
Lazer taramalı multifoton mikroskobu, esas olarak canlı hücrelerin, sabit hücrelerin ve dokuların derin yapılarını gözlemleme ve net ve keskin çok katmanlı Z-düzlem yapıları, yani optik dilimler elde etme yeteneğinde ortaya çıkan, optik mikroskopide önemli bir gelişmedir. Numunelerin üç boyutlu katı yapılarını oluşturmak için kullanılabilir. Konfokal mikroskop, objektif merceğin tüm odak düzlemini dolduracak şekilde genişletilen ve daha sonra objektif merceğin mercek sistemi aracılığıyla numunenin odak düzlemi üzerinde çok küçük noktalara birleştirilen bir lazer ışık kaynağı kullanır. Objektif merceğin sayısal açıklığına göre parlak aydınlatma noktasının çapı yaklaşık 0.25-0.8 μ m, derinliği ise yaklaşık 0.{{7}'dir. }.5 mikron. Konfokal noktanın boyutu mikroskop tasarımı, lazer dalga boyu, objektif özellikler, tarama ünitesi durum ayarları ve numune özelliklerine göre belirlenir. Bir alan mikroskobunun aydınlatma aralığı ve derinliği genişken, eş odaklı bir mikroskobun aydınlatması, odak düzlemindeki bir odak noktasına odaklanır. Eş odaklı mikroskopinin temel avantajı, kalınlığı yaklaşık 0,5 ila 1,5 μm olan kalın floresan numuneler (en fazla 50 μ m veya daha fazla) üzerinde ince optik kesitler alabilmesidir. Optik dilim görüntüleri serisi, mikroskobun Z ekseni step motorunu kullanarak numuneyi yukarı ve aşağı hareket ettirerek elde edilebilir. Görüntü bilgilerinin toplanması, numunenin diğer konumlarından yayılan sinyallerden etkilenmeden * * düzlemi içerisinde kontrol edilir. Arka plan floresansının etkisi kaldırıldıktan ve sinyal-gürültü oranı artırıldıktan sonra, konfokal görüntülerin kontrastı ve çözünürlüğü, geleneksel alan aydınlatmalı floresan görüntülerine kıyasla önemli ölçüde iyileştirilir. Pek çok örnekte, karmaşık yapısal bileşenler karmaşık sistemler oluşturmak için iç içe geçer, ancak yeterli sayıda optik kesit toplandıktan sonra bunları üç boyutlu olarak yeniden oluşturmak için yazılım kullanabiliriz. Bu deneysel yöntem, biyolojik araştırmalarda hücreler veya dokular arasındaki karmaşık yapısal ve fonksiyonel ilişkileri açıklamak için yaygın olarak kullanılmaktadır.
