Lazer Tarama Multiphoton Mikroskopisinin Geliştirilmiş Avantajlarına Giriş
Lazer taraması multiphoton mikroskobu, esas olarak canlı hücrelerin, sabit hücrelerin ve dokuların derin yapılarını gözlemleme yeteneğinde ortaya çıkan ve net ve keskin çok katmanlı Z-düzlem yapıları elde etme yeteneğinde ortaya çıkan önemli bir iyileşmedir. Konfokal mikroskop, objektif merceğin tüm odak düzlemini doldurmak için genişletilen ve daha sonra nesnenin odak düzleminde objektif lensin lens sistemi aracılığıyla çok küçük noktalara yakınlaşan bir lazer ışık kaynağı kullanır. Objektif lensin sayısal diyaframına göre, parlak aydınlatma noktasının çapı yaklaşık 0. 25-0. 8 μ m'dir ve derinlik yaklaşık 0. 5-1}. 5 μ m'dir. Konfokal noktanın boyutu mikroskop tasarımı, lazer dalga boyu, nesnel özellikler, tarama birimi durum ayarları ve numune özellikleri ile belirlenir. Bir alan mikroskobunun aydınlatma aralığı ve derinliği büyüktür, konfokal mikroskopun aydınlatılması odak düzleminde bir odak noktasına odaklanır. Konfokal mikroskopinin temel avantajı, yaklaşık 0.5 ila 1.5 μm kalınlığında kalın floresan örnekleri (5 {10} μ m veya daha fazla) üzerinde ince optik kesit yapabilmesidir. Optik dilim görüntüleri serisi, mikroskopun Z eksenli step motoru kullanılarak numuneyi yukarı ve aşağı hareket ettirerek elde edilebilir. Görüntü bilgilerinin toplanması, örnek üzerindeki diğer konumlardan yayılan sinyallerden müdahale etmeden * * düzleminde kontrol edilir. Arka plan floresansının etkisini ortadan kaldırdıktan ve sinyal-gürültü oranının arttırılmasından sonra, konfokal görüntülerin kontrast ve çözünürlüğü, geleneksel alan aydınlatma floresan görüntülerine kıyasla önemli ölçüde geliştirilmiştir. Birçok örnekte, karmaşık yapısal bileşenler karmaşık sistemler oluşturmak için iç içe geç, ancak yeterli optik bölüm toplandıktan sonra, bunları üç boyutta yeniden yapılandırmak için yazılımı kullanabiliriz. Bu deneysel yöntem, biyolojik araştırmalarda hücreler veya dokular arasındaki karmaşık yapısal ve fonksiyonel ilişkileri açıklamak için yaygın olarak kullanılmaktadır.
