Optik mikroskobun floresan gözlemi
Floresan, bir floresan maddenin belirli bir dalga boyundaki ışıkla ışınlandığında neredeyse aynı anda daha uzun dalga boyuna sahip ışık yaydığı süreci ifade eder (Şekil 1). Belirli bir dalga boyundaki (uyarma dalga boyu) ışık, florofordakiler gibi bir moleküle çarptığında, foton enerjisi molekülün elektronları tarafından emilir. Daha sonra, elektronlar taban durumundan (S0) daha yüksek bir enerji düzeyine, uyarılmış duruma (S1') geçer. Bu sürece uyarma① denir. Elektron, 10-9–10-8 saniye boyunca uyarılmış durumda kalır ve bu sırada elektron bir miktar enerji kaybeder②. Elektronların uyarılmış durumdan (S1) çıkıp temel duruma③ geri dönme işlemi sırasında, uyarma işlemi sırasında emilen kalan enerji serbest bırakılır.
Floresan Jablonski Diyagramı
Floresan molekülün uyarılmış durumda kalma süresi, genellikle nanosaniye düzeyinde olan ve floresan molekülün kendisinin doğal bir özelliği olan floresans ömrüdür. Floresan ömür boyu görüntüleme teknolojisini kullanan Floresan Ömür Boyu Görüntüleme (FLIM), floresan yoğunluğu görüntülemeye ek olarak daha derinlemesine fonksiyonel ölçümler yapabilir ve moleküler konformasyon, moleküller arası etkileşimler ve moleküllerin mikro ortamı vb. elde edebilir. geleneksel optik görüntüleme ile elde edin.
Floresansın diğer bir önemli özelliği, uyarma ve emisyon tepe noktaları arasındaki dalga boyu farkı olan Stokes kaymasıdır (Şekil 2). Tipik olarak emisyon dalga boyu uyarma dalga boyundan daha uzundur. Bunun nedeni, elektronların, floresan madde uyarıldıktan sonra ve fotonları serbest bırakmadan önce gevşeme süreci yoluyla enerjilerinin bir kısmını kaybedecek olmalarıdır. Daha büyük Stokes kaymasına sahip floresan maddeleri, bir floresan mikroskobu altında gözlemlemek daha kolaydır.
floresan mikroskop
Floresan mikroskobu, floresan özelliklerini gözlem ve görüntüleme için kullanan ve hücre biyolojisi, nörobiyoloji, botanik, mikrobiyoloji, patoloji ve genetik gibi çeşitli alanlarda yaygın olarak kullanılan bir optik mikroskoptur. Floresan görüntüleme, yüksek hassasiyet ve yüksek özgüllük avantajlarına sahiptir ve belirli proteinlerin ve organellerin doku ve hücrelerdeki dağılımının gözlemlenmesi, kolokalizasyon ve etkileşim çalışması, iyon konsantrasyonu değişiklikleri gibi yaşam dinamik süreçlerinin izlenmesi için çok uygundur. , vesaire.
Hücrelerdeki moleküllerin çoğu flüoresan yaymaz ve onları görmek isterseniz, onları flüoresan olarak etiketlersiniz. Doğrudan etiketleme (DNA'yı etiketlemek için DAPI kullanmak gibi) veya antikorların antijen bağlama özelliklerini kullanarak immün boyama veya hedef proteinleri etiketlemek için floresan proteinleri (GFP, yeşil floresan proteini gibi) kullanma gibi birçok floresan etiketleme yöntemi vardır. ve tersine çevrilebilir bağlama. sentetik boyalar (Fura-2 gibi), vb.
Ters Floresan Mikroskop MF53-N
Şu anda floresan mikroskobu, çeşitli laboratuvarların ve görüntüleme platformlarının standart görüntüleme ekipmanı haline geldi ve günlük deneylerimiz için iyi bir yardımcı. Floresan mikroskoplar temel olarak üç kategoriye ayrılır: dikey floresan mikroskoplar (kesitleme için uygundur), ters floresan mikroskoplar (kesitleme dikkate alınarak canlı hücreler için uygundur), floresan stereoskoplar (bitkiler, zebra balığı (yetişkin/embriyo) gibi daha büyük örnekler için uygundur) ), medaka, fare/sıçan organları vb.).
Floresan mikroskobu görüntüleme teknolojisi yaygın olarak kullanılmaktadır ve tür bakımından zengindir ve yeni teknolojiler hala ortaya çıkmaktadır. Kendi araştırmanızı tamamlamak için teknolojiyi seçebilirsiniz.
