Floresan mikroskobu prensibi uygulaması ve kullanımı
(1) Floresan mikroskobunun prensibi ve yapısal özellikleri: floresan mikroskobu, filtre sistemi aracılığıyla belirli bir dalga boyundaki ışığı (3650 inç ultraviyole ışık veya 4200 inç mor mavi ışık gibi) yaymak için yüksek ışık verimliliğine sahip bir nokta ışık kaynağı kullanır. Numuneyi heyecanlandırmak için uyarma ışığı olarak. İçerisindeki floresan madde çeşitli renklerde floresans yaydıktan sonra objektif merceği ve göz merceğinin büyütülmesiyle gözlenir. Bu sayede güçlü kontrastlı bir arka plan altında, floresans çok zayıf olsa bile tanımlanması kolay ve duyarlılığı yüksektir. Esas olarak hücre yapısı ve fonksiyonu ile kimyasal bileşimin araştırılması için kullanılır. Bir floresan mikroskobunun temel yapısı, sıradan bir optik mikroskop artı bazı aksesuarlardan (floresan ışık kaynağı, uyarma filtresi, iki renkli ışın ayırıcı ve engelleme filtresi vb.) oluşur. Floresan ışık kaynağı - genellikle çeşitli dalga boylarında ışık yayabilen ultra yüksek basınçlı cıva lambası (50-200W) kullanılır, ancak her floresan maddenin en güçlü floresansı üreten bir uyarılma dalga boyu vardır, dolayısıyla bir uyarma filtresi (Genel olarak, yalnızca belirli bir dalga boyundaki uyarı ışığının geçmesine ve numuneyi ışınlamasına izin verirken diğer ışığı emmesine izin veren ultraviyole, mor, mavi ve yeşil uyarma filtreleri vardır. Her madde uyarılmış ışıkla ışınlandıktan sonra çok kısa bir sürede ışınlama dalga boyundan daha uzun dalga boyunda görünür floresans yayar. Floresan spesifiktir ve genellikle uyarma ışığından daha zayıftır. Spesifik floresansı gözlemlemek için objektif merceğin arkasında bir bloke edici (veya bastırıcı) filtre gereklidir. İki işlevi vardır: birincisi, floresansı bozmamak ve gözlere zarar vermemek için uyarma ışığının göz merceğine girmesini absorbe etmek ve engellemek; diğeri ise belirli bir floresan rengini gösteren belirli bir floresansın seçilmesi ve geçmesine izin verilmesidir. İki filtrenin birlikte kullanılması gerekmektedir.
Optik yollarına göre iki tip floresan mikroskobu vardır:
1. Transmisyon floresans mikroskobu: Uyarma ışık kaynağı, floresansı uyarmak için numune materyalinin içinden bir yoğunlaştırıcı mercekten geçirilir. Yaygın olarak bir karanlık alan toplayıcı kullanılır ve aynayı, uyarma ışığının numuneye yönlendirileceği ve atlanacağı şekilde ayarlamak için sıradan bir toplayıcı da kullanılabilir. Bu eski bir floresan mikroskoptur. Avantajı, düşük büyütmede floresansın güçlü olmasıdır, ancak dezavantajı, büyütme arttıkça floresansın azalmasıdır. Bu nedenle daha büyük numune malzemelerini gözlemlemek daha iyidir.
2. Epi-floresan mikroskobu, modern zamanlarda geliştirilen yeni bir tür floresan mikroskobudur. Aradaki fark, uyarma ışığının objektif mercekten numunenin yüzeyine düşmesidir, yani aydınlatma yoğunlaştırıcısı olarak aynı objektif mercek ve floresans toplamak için objektif mercek kullanılır. Işık uranyumundan 45 derece uzakta olan ışık yoluna bir dikroik ışın ayırıcının eklenmesi gerekir. Uyarma ışığı objektif merceğe yansıtılır ve numune üzerinde toplanır. Numune tarafından üretilen floresans ve objektif merceğin mercek yüzeyi ve kapak camı yüzeyi tarafından yansıtılan uyarma ışığı, aynı anda objektif merceğe girer ve uyarma ışığını floresandan ayırmak için iki renkli ışın ayırıcıya geri döner. , artık uyarım ışığı bloke edici filtreler tarafından emilir. Farklı uyarma filtresi/iki renkli ışın ayırıcı/engelleme filtresi kombinasyonuna geçmek gibi, farklı floresan reaksiyon ürünlerinin ihtiyaçlarını karşılayabilir. Bu tür floresans mikroskobunun avantajı, görüş alanının aydınlatmasının eşit olması, görüntülemenin net olması ve büyütme ne kadar büyük olursa floresansın o kadar güçlü olmasıdır.
(2) Floresan mikroskobu nasıl kullanılır?
1. Işık kaynağını açın; ultra yüksek basınçlı cıva lambasının en parlak noktaya ulaşması için birkaç dakika ısınması gerekir.
2. Transmisyon floresan mikroskobunun, ışık kaynağı ile kondansatör arasına gerekli uyarma filtresini takması ve ilgili engelleme filtresini objektif merceğin arkasına takması gerekir. Epi-floresan mikroskopların gerekli uyarma filtresini/çift renkli ışın ayırıcıyı/engelleme filtresi eklerini ışık yolundaki yuvalara yerleştirmesi gerekir.
3. Düşük büyütmeli bir mercekle gözlemleyin ve ışık kaynağının merkezini, farklı floresans mikroskop modellerinin ayarlama cihazına göre tüm aydınlatma noktasının merkezinde yer alacak şekilde ayarlayın.
4. Numune parçasını yerleştirin ve odaklandıktan sonra gözlemleyin. Kullanım sırasında dikkat edilmelidir: Göze zarar vermemek için doğrudan uç filtreyle gözlemlemeyin; numuneleri yağlı mercekle incelerken, floresanssız özel bir yağlı mercek kullanılmalıdır; Yüksek basınçlı cıva lambası kapatıldıktan sonra hemen tekrar açılamaz, test edilmesi gerekir. 5 dakika sonra yeniden başlatılabilir, aksi takdirde kararsız hale gelir ve cıvalı lambanın ömrünü etkiler.
(3) Mavi-mor ışık filtreli öğretim platformundaki floresan mikroskobu altında yüzde 0,01 akridin turuncusu floresan boyayla boyanmış hücreleri gözlemleyin. Çekirdek ve sitoplazma, iki farklı renkte floresans (koyu yeşil ve turuncu-kırmızı) üretecek şekilde uyarılır.
