Floresan mikroskobu ve sıradan optik mikroskop farklılıkları ve özellikleri
Floresan mikroskobu ve sıradan optik mikroskop farklıdır; numuneyi gözlemlemek için sıradan ışık kaynağının aydınlatılması yoluyla değil, numune içindeki floresan malzemenin belirli bir dalga boyundaki ışığın (genellikle ultraviyole, mavi-mor ışık) uyarılmasıyla yapılır. Mikroskop altında, böylece floresan mikroskobu ışık kaynağının floresansı doğrudan bir aydınlatma yapmaz, ancak enerji kaynağının numunesi içindeki floresan malzemenin bir tür uyarılması olarak kullanılır. Numuneyi gözlemleyebilmemizin nedeni, ışık kaynağının aydınlanmasından değil, numunedeki floresan malzemenin uyarım ışık enerjisini emdikten sonra sunduğu floresans olgusundan kaynaklanmaktadır. Floresan mikroskobunun özelliklerinin, özellikle de ışık kaynağının, uyarma ışığının çok sayıda spesifik dalga boyu aralığını sağlayabildiği, böylece incelenen numune içindeki floresan malzemenin, uyarma ışığının gerekli yoğunluğunu elde edebildiği görülebilir. Aynı zamanda floresan mikroskobunun uygun bir filtre sistemine sahip olması gerekir. Floresan mikroskobu, floresan histokimyasının temel aracıdır. Ultra yüksek basınçlı ışık kaynağı, filtre sistemi (uyarma ve bastırma filtre plakası dahil), optik sistem ve fotoğraf sistemi ve diğer ana bileşenlerden oluşur, numuneyi floresans yaymaya teşvik etmek için belirli bir ışık dalga boyunun kullanılmasıdır.
1. floresan uyarma yolu: ışığın dalga boyu aralığına göre UV uyarma yöntemine (ultraviyole aydınlatma kullanılarak) ve BV uyarma yöntemine (mavi mor ışık kullanılarak) ayrılır, iki tür UV uyarma yöntemi ultraviyole ışığın yakınında 400 nm'den daha kısadır. heyecan. Bu yöntemde görünür bir uyarma ışığı yoktur, bu nedenle gözlemlenen floresans, boyanın doğal floresansını gösterir ve numune üzerindeki spesifik floresansı, arka plan dokusunun kendi kendine floresansından ayırt etmek kolaydır.
2. BV uyarma yöntemi: Yöntem, uyarma için ultraviyoleden mavi ışığa 404nm, 434nm'yi merkeze alır. Bu yöntem numuneyi ışınlamak için mavi ışık kullanır, bu nedenle floresans gözlem sisteminin kesme filtresinin, mavi ışığı tamamen engelleyebilen ve istenen yeşil ve sarı floresansı yeterince geçirebilen bir filtre kullanması gerekir. Floresan antikor yöntemi için floresan pigmentler. Uyarma ışığının maksimum absorpsiyonunun dalga boyu ile floresansın maksimum emisyonunun dalga boyu birbirine yakın olduğundan, BV uyarma yönteminde kullanılan filtrelerin keskin kesici filtreler olması gerekir. Bu yöntem, uyarı ışığı olarak mavi ışık kullanır, böylece florokromun emme verimliliği daha yüksek olur ve daha parlak bir görüntü elde edilebilir. Dezavantajı ise 500 nm'nin altındaki floresansın görülememesi, 500 nm'nin üzerinde ise görüntünün tamamının sarı görünmesidir. Floresan antikor yönteminde, özgüllüğün çoğu, florokromun benzersiz rengine göre değerlendirilir; bu nedenle yukarıda açıklanan BV uyarma yönteminin dezavantajları, ince özgüllük tartışılırken son derece etkili olma eğilimindedir.
