Konfokal mikroskopi için floresan probların seçim adımlarını ve yöntemlerini ayrıntılı olarak açıklayın
Konfokal mikroskoplarla yapılan deneylerde, numunenin kendisinin otofloresansı veya ekzojen maddeler kullanılarak bazı deneysel göstergeler saptanabilir, ancak test edilecek maddelerin çoğu ölçülebilir floresana sahip değildir ve floresan problarla etiketlenmesi gerekir. Ölçülebilir bir floresan sinyaline sahiptir. Peki, konfokal mikroskopi için floresan problar nasıl seçilir?
1. Deneyin amacına göre test edilecek göstergeleri belirleyin
Saptama indeksi belirlendikten sonra, floresan probların seçim aralığı da belirlenir. Deneyde hangi floresan probun kullanılacağı seçiminin deneyin amacına göre belirlendiği görülmektedir. Örneğin, deneyin amacı atriyal fibrilasyon meydana geldiğinde kardiyomiyositlerdeki kalsiyum iyonlarının değişikliklerini incelemekse, test edilecek maddenin kardiyomiyositlerdeki kalsiyum iyonları olduğu belirlenebilir ve floresan probların seçim aralığı sınırlıdır. canlı hücreleri etiketleyebilen kalsiyum iyon probları. İğne.
2. Mevcut floresan probların aralığını belirleyin
Yeni deneysel maddeler veya göstergeler için, deneyin amacı yeni flüoresan probları keşfetmek değilse, olgun probları ve etiketleme yöntemlerini uygulamayı seçebilirsiniz. Test edilecek maddeyi etiketleyebilen flüoresan probların tipi veya aralığı, yurtiçi ve yurtdışındaki tanınmış reaktif şirketlerinin yetkili literatürü veya ürün katalogları araştırılarak belirlenebilir.
3. Floresan probun özelliklerinin, floresan numunelerinin hazırlanmasına yönelik gereklilikleri karşılayıp karşılamadığını araştırın.
Floresan probların özellikleri, numunelerin etiketlenmesini ve deneysel sonuçları doğrudan etkiler. Bu nedenle, deneyde floresan probları seçmeden ve numuneleri etiketlemeden önce, floresan özelliklerini tam olarak anlamak gerekir. Araştırılacak floresan probların özellikleri şunları içerir:
1. Işık problarının ve numunelerin reaksiyon özellikleri
2. Floresan probların hassasiyeti ve floresan yoğunluğu
3. Floresan problarla etiketlenmiş numunelerin spektral özellikleri
4. Floresanın kararlılığı
5. Numunedeki çoklu floresan arasındaki etkileşim
