Doku bloklarının hacmine göre biyomikroskopi
Biyolojik Mikroskopi Şu ana kadar soğuk fiksasyon, dondurulmuş ultra ince kesit ve dondurarak kurutma, doku ve hücre röntgen mikrokesitleri için rutin yöntemlerdir. Bu yöntemin detayları şu şekilde açıklanmaktadır:
Kondansatörlü biyolojik mikroskoplar için, kondansatör parlaklığı orta seviyeye getirmek için yukarı ve aşağı hareket ettirilebilir ve değişken ışığın açıklığı da orta düzeyde bir 9b parlaklık elde etmek için değiştirilebilir. Işık güneşliyse, yoğunlaştırıcı uygun şekilde yükseltilebilir ve değişken ışık kaynağının açıklığı uygun şekilde genişletilebilir. Işık çok güçlüyse, yoğunlaştırıcı mercek uygun şekilde alçaltılabilir ve kesişen ışığın açıklığı uygun şekilde azaltılabilir. Bu durumda hala göz kamaştırıyorsanız, uygun filtreyi seçip kondansatörün altındaki brakete yerleştirebilirsiniz. Bu meşe sizi tatmin eden parlaklığı elde edebilecektir. Elbette kondansatörün üst ve alt konumlarının ayarlanması, değişken optik okumanın açıklık boyutunun ayarlanması ve uygun filtrenin seçilmesi, deneyim kazanmak için belirli bir süre pratik yapmayı gerektirir.
Biyolojik mikroskopideki çok önemli bir konu, hücrelerin örneklenmesi ve ayrılması sürecinde, dondurarak kurutma ve reçine gömme (FD), ultra ince agregatların dondurulması ve dondurarak kurutma sonrasında her parçadaki 65 elementin içeriğinin ortaya çıkmasıdır. dikkatli bir şekilde ele alınmalıdır. Analiz edilecek hücreler zarar görmez. Çünkü X-ışını mikroanalizi birçok adımı içermesinin yanı sıra maliyeti de oldukça yüksektir. Analizi yapılan hücreler uzun süre ve çok adımlı işlemlerden sonra hasar görmüş veya ölü hücreler ise yanlış sonuçlara varmak çok üzücüdür. Örneğin kolajenaz tedavisiyle ayrılan kardiyomiyositlerin iki şekli vardır; biri uzun çubuk şeklinde, diğeri ise yuvarlaktır. İkincisi, hücre izolasyonu sırasında hasar gören ölmekte olan hücrelerdir.
Biyomikroskopi Bu iki tip hücrede elektrolitlerin miktarı ve dağılımı oldukça farklıdır. Na, dairesel kardiyomiyositlerde çok yüksek ve K çok düşüktür ve nematodlarda ca konsantrasyonu çok yüksektir. Diğer analiz yöntemleriyle kontrol edildikten sonra yuvarlak hücrelerdeki yüksek Na ve düşük K ile mitokondrideki yüksek Ca'nın, hücre ayırma işlemi sırasında hücre zarının hasar görmesinden kaynaklandığı kanıtlandı. Hücrelerin ve dokuların buz gibi fiksasyon yöntemi genellikle önce söndürme ve fiksasyonu benimsemek ve daha sonra bunları sıvı nitrojende depolamaktır. Söndürme fiksasyonu koruma etkisi açısından çok önemlidir. Canlı hücreler veya taze dokular su açısından zengindir. Söndürme sırasında, hücrelerin veya dokuların ezilmiş soğutucuyla doğrudan temas halinde olan kısımları (özellikle sıvı nitrojenle söndürme sırasında) genellikle önce dondurulur ve sabitlenir, böylece bir "kabuk" oluşturulur, bu da hücrelerin merkezi kısımlarının ezilir ve soğukta sabitlenir. Bu nedenle, X çizgisi mikro alan analizi yapılırken genellikle daha büyük hücrelerin merkezinde buz kristallerinin olduğu bulunur. Bunu önlemek için, kırılmış soğutucu olarak erime noktası sıvı nitrojenden yüksek ancak 806c'den düşük olan bir madde kullanılır. Bu tür pek çok madde var ama en ucuzu konsantre propandır (kaynama noktası - 42.120c, erime noktası - 187.10c, molekül ağırlığı 44.1) ve soğuma hızı en hızlı olanıdır. Ancak dezavantajı yanıcı olmasıdır.
Biyolojik mikroskop, kas lifini özel bir rafa yerleştirebilir, böylece kas lifi kasılması belirli bir aşamaya ulaştığında ve sabitlenmesi gerektiğinde, sıvı propanı kas lifine püskürtmek ve onu söndürmek ve sabitlemek için hemen nozülü çalıştırın. Daha sonra kas lifleri çerçeveyle birlikte çıkarılarak sıvı nitrojen içerisine konuldu. Kan hücrelerini veya izole edilmiş hücreleri sabitliyorsanız, önce hücreleri düşük hızda santrifüjleme yoluyla konsantre edin, hücreleri iyi termal iletkenliğe sahip gümüş bir şişeye aktarın, şişeyi sıvı propana yerleştirin ve sabitleme için dondurun. Hall laboratuvarında sıçan pankreası sabitlenirken, iki çelik blok sıvı helyum (veya sıvı nitrojen) ile önceden soğutuldu ve iki bakır blok forsepsle kelepçelendi ve söndürülmesi ve sabitlenmesi için pankreasın önüne ve arkasına yerleştirildi. pankreas. Dokular veya hücreler, söndürüldükten ve sabitlendikten sonra uzun süreli depolama için sıvı nitrojende saklanabilir.
Biyolojik Mikroskopi En saygın donmuş ultra ince kesit yöntemine ek olarak, bilim adamlarının kullandığı başka bir biriktirme tekniği daha var. Analizden önce hareketsiz hale getirmek için analiz edilecek bileşenle birlikte bir çökelti oluşturmak üzere bir madde eklenir ve çökelti daha sonra analiz edilir. Örneğin insanlar genellikle kas hücrelerinde ca biriktirmek için oksalat ve piroantimonat kullanırlar. Birincisi sitoplazmadaki düşük Ca konsantrasyonuna yeterince duyarlı değildir; piroantimonat daha hassastır ve beyinde serbest Ca ile elektron yoğun birikintiler oluşturabilir, ancak piroantimonat sodyum, manganez, baryum, demir ile uyumlu değildir. Ayrıca birikintiler oluşur ve daha az spesifiktir. Numune hazırlama süreci, sıradan transmisyon elektron mikroskobu ultra ince kesit numunelerinin hazırlanmasına benzer; aradaki fark, yüzde 3 potasyum piroantimonatın (fosfat tamponlu salin, pH 7,6) fiksasyondan önce 6 saat boyunca sabitlenmesi ve lekeli kas ultra ince kesitleri üzerinde sabitlenmesidir. Her sarkomerin A ve 2 bantlarının orta hatlarında siyah birikintiler görüldü ve X-ışını mikro analizi için boyanmamış bölümler kullanıldı. Diaminobenzidin tetrahidroklorür (DAB), hem içeren maddeleri vb. çökeltmek için kullanıldı. Histokimyasal çöktürme reaksiyonu ve x-ışını mikro-diferansiyasyon köprüsünün kombinasyonu, donmuş ultra ince kesit koşullarına sahip olmayan laboratuvarlarda düşünülebilir. Analiz edilecek elementlerin tepe yüksekliğine göre yarı kantitatif yapılabilir.
