Multifoton Lazer Taramalı Mikroskopinin Faydaları ve Sınırlamaları
Avantajları
① Uyarım kırmızı veya kızılötesi ışıkla gerçekleştirilir ve bu da düşük ışık saçılımına yol açar. Küçük parçacıkların saçılması dalga boyunun dördüncü kuvvetiyle ters orantılıdır.
② İğne deliği gerekmediği için görüntüleme düzleminden daha fazla dağınık foton toplanabilir.
③ Bir iğne deliği, odak dışı bölgelerden veya odak noktasından yayılan dağınık fotonları ayırt edemez. Multifoton mikroskopi, derin görüntüleme için mükemmel bir sinyal-gürültü oranına ulaşır.
④ Tek fotonlu uyarım için kullanılan ultraviyole veya görünür ışık, ışın odak düzlemine ulaşmadan önce örnek tarafından emilme ve zayıflama eğilimi gösterir, bu da derin katman uyarımını zorlaştırır.
⑤ Biyolojik mikroskobik gözlem için öncelikli husus, numunelerin biyolojik aktivitesinin korunması, nemin, iyon konsantrasyonunun ve oksijen ve besin dolaşımının muhafaza edilmesidir. Optik gözlem için hem ısı hem de foton enerjisinin hücrelere zarar vermeyecek ışınlama seviyelerinde tutulması gerekir.
⑥ Multifoton mikroskopların başka birçok avantajı vardır. 3D çözünürlük, derin penetrasyon, saçılma verimliliği, arka plan ışığı, sinyal-gürültü oranı ve kontrol edilebilirlik açısından, geleneksel lazer mikroskoplarla karşılaştırılamayan veya karşılaştırılamayan üstün özelliklere sahiptirler.
Multifoton eş odaklı lazer tarama mikroskopları çeşitli araştırma ve uygulama alanlarına genişletildi. Numunelerin doğal koşullar altında üç boyutlu, müdahalesiz olarak gözlemlenmesine olanak tanır ve sistemin çözünürlüğünü ve sinyal-gürültü oranını artırır. Çoklu foton uyarılmasının neden olduğu malzeme özelliklerindeki değişikliklerden yararlanılarak, 3 boyutlu yüksek yoğunluklu veri depolama ve keyfi üç boyutlu yönlerde mikro imalat da gerçekleştirilebilir ve bu da yüksek uygulama değeri sunar. Mekanik, malzeme, lazer teknolojisi ve çok fotonlu eş odaklı mikroskopi ile ilgili diğer alanlardaki daha fazla ilerlemeyle, çok fotonlu eş odaklı lazer taramalı mikroskopların daha fazla gelişme ve daha geniş uygulama elde etmesi bekleniyor.
Sınırlamalar
① Yalnızca floresans görüntülemeyi destekler.
② Numunenin uyarı ışığını emen kromoforlar (pigmentler gibi) içermesi halinde numunede termal hasar meydana gelebilir.
③ Çözünürlük biraz azalır. Bu, aynı odaklı bir iğne deliğinin eşzamanlı olarak benimsenmesiyle iyileştirilebilmesine rağmen, sinyal kaybı meydana gelecektir.
④ Pahalı ultra hızlı lazerlerle sınırlı olan multifoton taramalı mikroskoplar nispeten yüksek bir maliyete sahiptir.
