Floresan Toplam Dahili Yansıma Floresan Mikroskobu Uygulaması
TIRFM (Total Internal Reflection Fluorescence Microscope), toplam iç yansıma floresan mikroskobu, ışık kırılma indisi yüksek bir ortamdan daha düşük kırılma indisine sahip bir ortama girdiğinde, geliş açısı yeterince büyük ise ışığın tamamı kırılmadan yansır, ancak iki ortamın arayüzü, nesne yüzeyinin gözlemini gerçekleştirmek için arayüzün yakınında 100nm içinde flüoresanı harekete geçirebilen uçucu dalgalar üretir. Uyarma ışığı, geleneksel bir floresan mikroskobunun aydınlatıcısı veya özel bir aydınlatıcı aracılığıyla gönderilebilir ve lazerin geliş açısı kontrol edilebilir. Anlık alan uyarma yöntemi, uyarma ışığının dedektöre girmesini önlemek için kullanılır. Cam ve su arasındaki arayüzdeki uyarma ışığı, yansıma tarafından uygulanan tam bir iç üretir. Uyarma ışığının üstel zayıflaması nedeniyle, yalnızca toplam yansıma yüzeyine çok yakın olan numune alanı floresan yansıması üretecektir, bu da arka plan ışık gürültüsünün gözlem hedefine girişimini büyük ölçüde azaltır, bu nedenle bu teknoloji dinamik gözlemde yaygın olarak kullanılmaktadır. hücre yüzey maddelerinin
Toplam iç yansıma floresan mikroskobunun (TIRFM) şematik diyagramı
①Örnek ②Geçmeyen dalga aralığı ③Kapak camı ④Yağa daldırma ⑤Hedef ⑥Emisyon ışını (sinyali) ⑦Uyarma ışını
Toplam iç yansıma elde etmek için, büyük bir geliş açısı gereklidir, örneğin, cam-su arayüzündeki geliş açısı 61 dereceden büyüktür. Bu, prizma tabanlı TIRFM olarak adlandırılan bir prizma veya objektif tipi TIRFM olarak adlandırılan yüksek sayısal açıklığa sahip bir objektif lens ile elde edilebilir. Mevcut ticarileştirilmiş toplam iç yansıma floresan mikroskopları, genellikle yüksek hız ve yüksek hassasiyete sahip objektif lens tipindedir.
Toplam iç yansıma floresan mikroskobu, bazı biyolojik alanlarda yaygın olarak kullanılmaktadır çünkü nesnelerin yüzeyinde çok ince bir aralıkta (100 nm'den az) floresans gözlemi gerçekleştirebilir. Aşağıdaki uygulamalar gibi:
Hücre yüzeyi görüntülerinin gözlemlenmesi: hücre zarı yüzey yapısı, hücre yüzeyi teması, zar yüzey dinamiği/protein lokalizasyonu.
Tek moleküllü gözlem ve manipülasyon: miyozin, aktin ve Cy3-etiketli ATP.
Hücre zarı yüzey hareketi: vezikül yutulması, vezikül ekshalasyon ve vezikül ekzokrin gibi. the
Hücre zarında kalsiyum kıvılcım fenomeninin gözlemlenmesi, iyon kanalı izleme.
Moleküler motor araştırması: dönme motorları, hücre iskeleti proteinleri, polimerler, G proteinleri, halka proteinleri, nükleotid motorları.
Biyoloji alanına ek olarak, kimyasal moleküler yapıların gözlemlenmesi için kimya alanında da iyi uygulamalara sahiptir.
