Multifoton Lazer Taramalı Mikroskopinin Avantajları ve Sınırlamaları
1. Kırmızı veya kızılötesi ışıkla uyarılan ışığın saçılımı küçüktür (küçük parçacıkların saçılması, dalga boyunun dördüncü kuvvetiyle ters orantılıdır).
2. İğne deliklerine gerek yok, görüntüleme kesitinden daha fazla dağınık foton toplayabiliyor.
3. İğne delikleri, odaklanmamış veya odaklanmış alanlardan yayılan dağınık fotonları ayırt edemez ve çoklu fotonlar, derin görüntülemede daha iyi sinyal-gürültü oranına sahiptir.
4. Tek foton uyarımı için kullanılan ultraviyole veya görünür ışık, ışın odak düzlemine ulaşmadan önce örnek tarafından kolayca emilir ve zayıflatılır, bu da derin katmanların uyarılmasını zorlaştırır.
5. Biyolojik mikroskopi gözlemi açısından ilk husus, organizmanın aktif durumuna zarar vermemek ve su, iyon konsantrasyonu, oksijen ve besinlerin dolaşımını sürdürmektir. Işık gözlemi alanında hem termal hem de foton enerjisinin ışınlama dozu içerisinde kalması ve hücrelere zarar vermeyen ışık enerjisinin olması gerekmektedir.
6. Multifoton mikroskobunun da birçok avantajı vardır. Üç boyutlu çözünürlük, derinlik istilası, saçılma verimliliği, arka plan ışığı, sinyal-gürültü oranı, kontrol vb. açısından lazer mikroskopları, önceki lazer mikroskoplarının sahip olmadığı benzersiz veya üstün özelliklere sahiptir.
Multifoton eş odaklı lazer tarama mikroskobu, çeşitli araştırma ve uygulama alanlarına genişletilmiştir. Doğal hallerinde numuneler üzerinde üç boyutlu tahribatsız gözlem yapabilir ve sistemin çözünürlüğünü ve sinyal-gürültü oranını iyileştirebilir. Multifoton uyarımı sonrasında malzeme özelliklerinde meydana gelen değişikliklerden yararlanılarak, uygulama değeri yüksek olan üç boyutlu yükseklik verisi depolama ve herhangi bir yönde üç boyutlu mikrofabrikasyon da elde edilebilir. Multifoton ile ilgili mekanik, malzeme ve lazer teknolojilerinin daha da gelişmesiyle birlikte, buna inanılabilir. eş odaklı mikroskopi, multifoton eş odaklı lazer taramalı mikroskopi daha fazla gelişmeye ve daha geniş uygulamalara sahip olacak
Dezavantajları aşağıdaki gibidir:
1. Yalnızca floresans görüntüleme için.
2. Numunenin pigmentler gibi uyarım ışığını emebilen kromoforlar içermesi durumunda numune termal hasara maruz kalabilir.
3. Çözünürlük biraz azalır, ancak aynı odaklı küçük deliklerin aynı anda kullanılmasıyla iyileştirilebilmesine rağmen sinyal kaybı olacaktır.
4. Pahalı ultra hızlı lazerlerin sınırlamaları nedeniyle, multifoton taramalı mikroskopların maliyeti nispeten yüksektir.
