Bir floresan mikroskobunun amacı, özellikleri ve kullanımı
Floresan mikroskobunun prensibi ve yapısal özellikleri: Floresan mikroskobu, uyarma olarak filtre sisteminden belirli bir dalga boyunda ışık (ultraviyole ışık 3650 inç veya mor mavi ışık 4200 inç gibi) yaymak için yüksek ışık verimliliğine sahip bir nokta ışık kaynağı kullanır. numunedeki floresanı uyarmak için ışık. Madde çeşitli renklerde flüoresans yaydıktan sonra objektif merceğin ve göz merceğinin büyütülmesiyle gözlenir. Bu sayede, güçlü kontrastlı bir arka plan altında, floresan çok zayıf olsa bile, tanımlanması kolaydır ve yüksek hassasiyete sahiptir. Esas olarak hücre yapısı ve işlevi ile kimyasal bileşimin araştırılması için kullanılır. Floresan mikroskobunun temel yapısı, sıradan bir optik mikroskop ve bazı aksesuarlardan (floresan ışık kaynağı, uyarma filtresi, iki renkli ışın ayırıcı ve bloke edici filtre, vb.) oluşur. Floresan ışık kaynağı—genellikle çeşitli dalga boylarında ışık yayan ultra yüksek basınçlı cıva lambası (50-200W) kullanılır, ancak her floresan maddenin en güçlü floresanı üreten bir uyarma dalga boyu vardır, bu nedenle bir uyarma filtresi (Genellikle, ultraviyole, mor, mavi ve yeşil uyarma filtreleri vardır), bunlar yalnızca belirli bir dalga boyundaki uyarma ışığının diğer ışığı emerken numunenin içinden geçmesine ve ışınlamasına izin verir. Her bir madde uyarma ışığı ile ışınlandıktan sonra çok kısa bir süre içinde ışınlama dalga boyundan daha uzun dalga boyuna sahip görünür floresans yayar. Floresan spesifiktir ve genellikle uyarma ışığından daha zayıftır. Spesifik flüoresanı gözlemlemek için, objektif merceğin arkasında bloke edici (veya baskılayıcı) bir filtre gereklidir.
İki işlevi vardır: biri, flüoresanı bozmamak ve gözlere zarar vermemek için uyarma ışığını absorbe etmek ve okülere girmesini engellemektir; diğeri, belirli bir flüoresan rengi göstererek belirli bir flüoresanı seçmek ve geçmesine izin vermektir. İki filtre birlikte kullanılmalıdır.
Optik yolları açısından iki tür floresan mikroskop vardır:
1. Transmisyon floresan mikroskobu: Uyarma ışık kaynağı, flüoresanı uyarmak için bir yoğunlaştırıcı mercek içinden numune materyalinden geçirilir. Yaygın olarak bir karanlık alan toplayıcı kullanılır ve aynayı uyarma ışığının yeniden yönlendirilmesi ve numuneye atlanması için sıradan bir toplayıcı da kullanılabilir. Bu daha eski bir floresan mikroskobu. Avantajı, floresansın düşük büyütmede güçlü olmasıdır, ancak dezavantajı, büyütmenin artmasıyla floresansın azalmasıdır. Bu nedenle, daha büyük numune malzemelerini gözlemlemek daha iyidir.
2. Epi-floresan mikroskobu, modern zamanlarda geliştirilen yeni bir floresan mikroskobu türüdür. Aradaki fark, uyarma ışığının objektif merceğinden numunenin yüzeyine düşmesidir, yani aydınlatma kondansatörü olarak aynı objektif merceğin ve flüoresan toplamak için objektif merceğin kullanılmasıdır. Işık yoluna, hafif uranyumdan 45 derece uzakta olan bir dikroik ışın ayırıcının eklenmesi gerekir. Uyarma ışığı objektif merceğe yansıtılır ve numune üzerinde toplanır. Numune tarafından üretilen floresan ve objektif merceğin mercek yüzeyi ve kapak camı yüzeyi tarafından yansıtılan uyarma ışığı aynı anda objektif merceğe girer ve uyarma ışığını floresanstan ayırmak için iki renkli ışın ayırıcıya geri döner , artık uyarma ışığı bloke edici filtreler tarafından emilir. Farklı uyarma filtresi/iki renkli ışın ayırıcı/engelleme filtresi kombinasyonuna geçmek gibi, farklı flüoresan reaksiyon ürünlerinin ihtiyaçlarını karşılayabilir. Bu tür flüoresan mikroskobunun avantajı, görüş alanının aydınlatmasının tekdüze olması, görüntülemenin net olması ve büyütme ne kadar büyükse flüoresansın o kadar güçlü olmasıdır.
(2) Floresan mikroskobu nasıl kullanılır.
1. Işık kaynağını açın ve ultra yüksek basınçlı cıva lambasının en parlak noktaya ulaşması için birkaç dakika ısınması gerekir.
2. Transmisyon floresan mikroskobunun, ışık kaynağı ile kondansatör arasına gerekli uyarma filtresini takması ve ilgili engelleme filtresini objektif merceğin arkasına takması gerekir. Epi-floresan mikroskopların, optik yoldaki yuvalara gerekli uyarma filtresi/çift renkli ışın ayırıcı/engelleme filtresi eklerini yerleştirmesi gerekir.
3. Düşük büyütmeli bir mercekle gözlemleyin ve ışık kaynağının merkezini, farklı floresan mikroskop modellerinin ayar cihazına göre tüm aydınlatma noktasının merkezinde yer alacak şekilde ayarlayın.
4. Numune parçasını yerleştirin ve odaklandıktan sonra gözlemleyin. Kullanım sırasında dikkat edilmelidir: Göze zarar vermemek için doğrudan uç filtre ile gözlem yapmayın; yağ merceğiyle numuneleri gözlemlerken, flüoresansız özel bir yağ merceği kullanmalısınız; yüksek basınçlı cıva lambası kapatıldıktan sonra hemen tekrar açılamaz, test edilmesi gerekir. 5 dakika sonra yeniden başlatılabilir, aksi takdirde kararsız hale gelir ve cıva lambasının ömrünü etkiler.
(3) Gözlem Öğretim platformunda bir flüoresan mikroskop altında mavi-mor bir ışık filtresi kullanılarak, o görülebilir. Akridin turuncu floresan boya ile boyanmış hücrelerin yüzde 01'i, çekirdek ve sitoplazma iki farklı floresans rengi (koyu yeşil ve turuncu kırmızı) üretmek üzere uyarılır.
