Lazer konfokal mikroskop ve geleneksel optik mikroskop arasındaki fark
Lazer Taramalı Konfokal Floresans Mikroskobu, biyolojik numunelerin üç boyutlu verilerini elde etmek için bilgisayar, lazer ve görüntü işleme teknolojisini kullanan nispeten gelişmiş bir moleküler ve hücre biyolojisi analiz cihazıdır. Esas olarak canlı hücrelerin yapısını ve belirli moleküllerin ve iyonların biyolojik değişikliklerini, kantitatif analizleri ve gerçek zamanlı kantitatif belirlemeleri gözlemlemek için kullanılır.
Lazer konfokal mikroskopinin prensibi: nokta aydınlatması ve nokta tespiti gerçekleştirmek için ışık kaynağının arkasına yerleştirilmiş aydınlatma iğne deliğini ve dedektörün önüne yerleştirilmiş tespit iğne deliğini kullanın. Işık kaynağından aydınlatma iğne deliğinden yayılan ışık, numunenin odak düzlemi üzerindeki bir noktaya odaklanır ve bu noktadan yayılan flüoresan, tespit iğne deliği üzerinde görüntülenir ve bu noktanın dışında yayılan herhangi bir ışık, tespit tarafından bloke edilir. iğne deliği. Aydınlatma iğne deliği ve tespit iğne deliği, ışınlanmış nokta veya tespit edilen nokta ile eşleniktir, dolayısıyla tespit edilen nokta konfokal noktadır ve tespit edilen noktanın bulunduğu düzlem, konfokal düzlemdir.
Bilgisayar, algılanan noktaları bilgisayar ekranında görüntü noktaları şeklinde görüntüler. Tam bir görüntü oluşturmak için, optik yoldaki tarama sistemi, tam bir konfokal görüntü oluşturmak için numunenin odak düzlemini tarar. Sahne Z ekseni boyunca yukarı ve aşağı hareket ettiği sürece, örneğin yeni bir katmanı eş odaklı düzleme taşınır ve örneğin yeni katmanı monitörde görüntülenir. Z ekseninin sürekli hareketi ile numunenin farklı katmanlarının sürekli görüntüleri elde edilebilir. Hafif kesme görüntüsü.
Geleneksel Işık Mikroskopları Arasındaki Fark
Geleneksel flüoresan mikroskoplarının aşılmaz bir eksikliği vardır: odak düzlemi dışındaki flüoresan yapılar bulanık ve bulanıktır. Bunun nedeni, çoğu biyolojik numunenin üst üste binen yapılara sahip olmasıdır. Floresan etiketli yapılar farklı seviyelerde dağıtılırsa ve üst üste binerse, odak düzleminin üstünden veya altından saçılan floresan da objektif lens tarafından alınır ve floresan mikroskobunun çözünürlüğü büyük ölçüde geliştirilir. azaltmak.
Geleneksel optik mikroskoplara dayanan lazer taramalı konfokal mikroskoplar, ışık kaynağı olarak lazer ışığını kullanır, eşlenik odaklama ilkesini ve cihazını benimser ve dijital görüntü işleme, gözlem, analiz ve gözlenen nesnelerin çıktısını gerçekleştirmek için bilgisayarları kullanır. Numune, hücrelerin üç boyutlu uzamsal yapısının tahribatsız gözlemi ve analizi için tomografik olarak taranabilir ve görüntülenebilir. Aynı zamanda, immünofloresan etiketleme ve iyon floresan etiketleme probları kullanan bu teknoloji, yalnızca sabit hücreleri ve doku kesitlerini gözlemleyemez, aynı zamanda canlı hücrelerin yapısının, moleküllerinin, iyonlarının ve yaşam aktivitelerinin gerçek zamanlı dinamik gözlemini ve tespitini gerçekleştirebilir. hücre altı düzeyde Ca2 plus , pH değeri, membran potansiyeli ve hücre morfolojisindeki değişiklikler gibi fizyolojik sinyallerin gözlemlenmesi, morfoloji, moleküler hücre biyolojisi, nörobilim, farmakoloji ve genetik alanlarında yeni nesil güçlü araştırma araçları haline geldi.
