Mikroskopi için rutin numunelerin hazırlanması için gereksinimler
Konfokal mikroskop, 1980'lerde geliştirilen çığır açıcı bir yüksek teknoloji ürünüdür ve günümüzde moleküler biyoloji ve yaşam bilimlerindeki önemli analitik araçlardan biridir. Konfokal mikroskopi, hücrelerin veya dokuların içindeki mikroyapının floresan görüntülerini elde etmek ve hücre altı düzeyde birçok fizyolojik sinyal makinesinin morfolojisindeki değişiklikleri gözlemlemek için görüntü işleme için bir bilgisayar kullanan, eklenen bir lazer tarama cihazı ile floresan mikroskop görüntülemeye dayanır. Morfoloji, moleküler hücre biyolojisi, nörobilim, farmakoloji, genetik ve diğer bilimsel alanlarda güçlü bir araştırma aracı olun.
Konfokal mikroskopi için numune hazırlama, tespitten önce kritik bir adımdır. Numunelerin floresan problarla (tekli, çiftli, üçlü) etiketlenmesi gerekir.
Ve
Örnekler sabit veya canlı dokular veya sabit veya canlı yapışık kültürler olabilir. Hücreler, Konfokal özel küçük kültür tabakları veya lamelleri üzerinde kültürlenmelidir. Hücreleri askıya alın, dilimleri sallayın veya bırakın ve lamelleri kapak filmi ile kaplayın. Numunenin Zda kalınlığı yaklaşık 1~2 mm'dir, kullanılan kapak camının kalınlığı 0,17 mm'den az olmalıdır ve sürgülü camın kalınlığı 0,8~1,2 arasında olmalıdır mm ve yüzey pürüzsüzdür, kalınlık eşittir ve belirgin bir girişim floresansı yoktur. Montaj ortamı genellikle sabit numuneler için kullanılır ve pH'ı 8 olan PBS'de hazırlanan gliserol kullanılır. 5-9, montaj için yaygın olarak kullanılır.
Rutin numune hazırlama gereklilikleri:
1. Boya seçimi
Konfokal mikroskop, ışık kaynağı olarak tek dalga boylu bir lazer kullandığından, floresan boyaların seçimi, konfokal mikroskopla donatılmış lazerin dalga boyuna göre yapılmalıdır. Aynı numunede birden fazla floresan boya varsa, emisyon dalga boyları da mümkün olduğunca dikkate alınmalıdır. Çapraz renk sorunlarından kaçınmak için üst üste binmeyin.
2. Numune taşıyıcı seçimi
Genel olarak, konfokal mikroskobun yüksek güçlü objektif merceği yağ merceğidir, sayısal açıklığı küçüktür ve mercek ile numune arasındaki çalışma mesafesinin 0.17 mm'den fazla olmaması gerekir. Slaytlar ve lameller gayet iyi. Asılı hücreler veya asılı parçacıklar ise, numuneyi gözlem için taşımak üzere eş odaklı bir mikroskoba ayrılmış bir petri kabı kullanılabilir.
3. Montaj ortamı seçimi
Numunenin yalnızca bir kez gözlenmesi gerekiyorsa ve floresan kolayca sönmüyorsa, slaytı kapatmak için belirli bir gliserol karışımı konsantrasyonu seçebilirsiniz. Numunenin belirli bir süre yerleştirilmesi ve birden çok kez alınması gerekiyorsa, flüoresan sinyallerinin kaybını azaltmak için bir flüoresan önleyici söndürme montaj ortamı seçilmelidir.
