Mikroskopi deneylerinde boyamadan önce bakterilerin sabitlenmesinin nedenleri:
Boyaların lekelenmesi için hücreleri öldürmek daha kolaydır.
Bakterilerin cam slaytlara yapışmasını ve su ile kolayca yıkanmamasını sağlayın.
Sıkıştırılırken yavaşça hava kuruması gerekir. İşlemi hızlandırmak gerekiyorsa, alkol lambasının alevinin üzerindeki mesafeden birkaç kez kurutabilirsiniz. Cam slaytını ısınana kadar kurutmayın, aksi takdirde bakteriyel yaşam formuna zarar verebilir
Gram Boyama ve Bakterilerin Mikroskobik Gözlemi
Deney prensibi
Gram Boyama Prensibi: Bakterilerin Gram Boyamasına Farklı Reaksiyonları, hücre duvarlarının bileşimindeki ve yapısındaki farklılıklardan kaynaklanır. Gram pozitif bakterilerin hücre duvarı esas olarak bir peptidoglikan ağından oluşur. Etanol ile muamele edildiğinde, dehidrasyon ağ yapısının gözenek boyutunda ve geçirgenliğinde bir azalmaya neden olur, bu da kristal menekşe iyot kompleksinin yıkanmasını ve hücrenin içinde tutulmasını zorlaştırır. Sömürgecilik ve karşı boyamadan sonra, başlangıç boyasının mavi mor rengi hala korunur. Gram negatif bakterilerin hücre duvarındaki peptidoglikan tabakası incedir ve yüksek lipit içeriğine sahiptir. Bu nedenle, renklendirildiğinde, lipit etanol (veya aseton) içerisinde çözündürülür, bu da hücre duvarının geçirgenliğini arttırır ve kristal violet iyot kompleksinin yıkanmasını kolaylaştırır. Karşı boyama ile karşı boyama yaptıktan sonra, hücreler karşı boyanın kırmızı rengi ile boyanır. Mikroskop Görüntüleme Prensibi: Modern sıradan optik mikroskoplar, büyütme ve görüntü için iki set lens sistemi, bir mercek ve objektif lens kullanır, bu nedenle genellikle bileşik mikroskoplar olarak adlandırılırlar. Bir mikroskopun optik sisteminde, objektif lensin performansı en kritiktir ve yağ merceğinin büyütülmesi, mikrobiyolojik araştırmalar için en önemli olan en yüksek olanıdır. Cam slayt ve lens arasında lens yağı eklemek esas olarak aydınlatma parlaklığını arttırmak ve mikroskopun çözünürlüğünü arttırmaktır. Hava yerine ışık yayılımı için yağ kullanmak, ışığın kırılmasını veya toplam yansımasını azaltır ve gözlemlenen görüntüyü netleştirir.
