Floresan Mikroskopun Prensibi ve Yapısı
Floresan mikroskobu, uyarma ışığı olarak bir renk filtreleme sistemi aracılığıyla belirli bir dalga boyunda ışık (3650 inç ultraviyole ışık veya 4200 inç menekşe mavi ışık gibi) yayan ve numunedeki floresan maddeleri uyaran, yüksek ışık verimliliğine sahip bir nokta ışık kaynağı kullanır. çeşitli floresans renkleri yayar. Daha sonra objektif ve oküler büyütülerek gözlemlenir. Bu şekilde, zayıf floresansta bile kolayca tanınabilir ve güçlü kontrast arka planlar altında son derece hassastır; temel olarak hücre yapısı ve fonksiyonunun yanı sıra kimyasal bileşimi incelemek için kullanılır. Bir floresan mikroskobunun temel yapısı, sıradan bir optik mikroskop ve bazı aksesuarlardan (floresan ışık kaynağı, uyarma filtresi, bikromatik ışın ayırıcı ve engelleme filtresi vb.) oluşur. Floresan ışık kaynakları - genellikle çeşitli dalga boylarında ışık yayabilen ultra yüksek basınçlı cıva lambaları (50-200W) kullanır. Bununla birlikte, her flüoresan madde, en güçlü flüoresansı üreten bir uyarma ışığı dalga boyuna sahiptir, bu nedenle, yalnızca belirli bir uyarma ışığı dalga boyunun geçmesine ve aydınlatmasına izin vermek için uyarma filtrelerinin (genellikle ultraviyole, mor, mavi ve yeşil uyarma filtreleri) eklenmesi gerekir. numune diğer tüm ışığı emerken. Uyarılmış ışıkla ışınlandıktan sonra her madde, çok kısa bir süre içinde ışınlamadan daha uzun dalga boyuna sahip görünür floresans yayar. Floresansın özgüllüğü vardır ve genellikle uyarma ışığından daha zayıftır. Spesifik floresansı gözlemlemek için objektif merceğin arkasına bloke edici (veya bastırıcı) bir filtrenin eklenmesi gerekir. İki işlevi vardır: birincisi, floresansın bozulmasını ve gözlere zarar vermesini önlemek için uyarım ışığını emer ve göz merceğine girmesini engeller; ikinci olarak, belirli bir floresans rengini görüntüleyerek belirli bir floresansın geçmesine izin verir ve seçer. Her iki filtre tipinin birlikte kullanılması için seçilmesi gerekmektedir.
Optik yollarına bağlı olarak iki tip floresan mikroskobu vardır:
1. Transmisyon floresans mikroskobu: Uyarma ışık kaynağı, floresansı uyarmak için numune malzemesi boyunca bir yoğunlaştırıcı aracılığıyla iletilir. Yaygın olarak kullanılan karanlık alan ışık toplayıcıları veya sıradan ışık toplayıcıları, uyarıcı ışığı ve yan ışığı numuneye dönüştürmek üzere reflektörü ayarlamak için kullanılabilir. Bu nispeten eski moda bir floresans mikroskobudur. Avantajı düşük büyütmede floresansın güçlü olması, dezavantajı ise büyütme arttıkça floresansın zayıflamasıdır. Bu nedenle daha büyük numune malzemelerinin gözlemlenmesi daha iyidir.
2. Düşen ışınlı floresans mikroskobu Bu, modern zamanlarda geliştirilen yeni bir tür floresans mikroskobudur. Öncekinden farklı olarak, uyarım ışığı, aydınlatma yoğunlaştırıcısı ve floresans toplamak için kullanılan objektif merceği ile aynı objektif merceğini kullanarak objektif merceğinden numunenin yüzeyine düşer. Hafif uranyuma 45 derecelik açı yapan optik yola çift renkli ışın ayırıcının eklenmesi gerekiyor. Uyarma ışığı objektif merceğe yansıtılır ve numune üzerinde yoğunlaştırılır. Numune tarafından üretilen floresansın yanı sıra objektif merceğin ve kapak camının yüzeyinden yansıyan uyarım ışığı, aynı anda objektif merceğe girer ve uyarılma ve floresansı ayırarak dikroik ışın ayırıcıya geri döner. Artık uyarım daha sonra bloke edici filtre tarafından emilir. Farklı uyarma filtreleri/çift renkli ışın ayırıcılar/engelleyici filtre kombinasyonları kullanılırsa farklı floresan reaksiyon ürünlerinin ihtiyaçlarını karşılayabilir. Bu floresan mikroskobun avantajı, görüş alanı aydınlatmasının eşit olması, görüntülemenin net olması ve büyütme ne kadar büyük olursa floresansın o kadar güçlü olmasıdır.
