Elektron mikroskobu için biyolojik numunelerin hazırlanması ve gözlemlenmesi
Mikroskopun çözünürlüğü kullanılan ışığın dalga boyuna bağlıdır; elektron mikroskobu 1933'te ortaya çıkmaya başladı, ışık kaynağı olarak elektron ışınının görünür ışığından çok daha kısa bir dalga boyunun kullanılmasından kaynaklanıyordu. optik mikroskobun büyük ölçüde geliştirdiğinden daha fazlasını başarabilir. Farklı ışık kaynağı aynı zamanda elektron mikroskobu ile optik mikroskop arasındaki bir dizi farklılığı da belirler.
Elektron ışınının görüntüleme prensibindeki farklılıklara ve numunenin farklı yollardaki rolüne göre, modern elektron mikroskobu bir takım türler oluşturacak şekilde geliştirilmiştir; şu anda * yaygın olarak kullanılanlar transmisyon elektron mikroskobu ve taramalı elektrondur. mikroskopta, ilki değişiklik aralığının toplam büyütmesinin 1,000-1,000,000 katı aralığında olabilir, ikincisi ise {'nin toplam büyütmesinde olabilir. Aradaki değişikliklerin toplam büyütmesinin {4}},000 katı. Bu deney, iki tip mikroskop, transmisyon elektron mikroskobu ve taramalı elektron mikroskobu için numunelerin hazırlanmasına odaklanmaktadır.
Malzemeler
1. Escherichia coli (Escherichia coli, Escherichia coli) eğimli suşu.
2. Çözeltiler veya reaktifler Amil asetat, konsantre sülfürik asit, susuz etanol, steril su, %2 sodyum fosfotungstik asit (pH 6.5-8.0) sulu çözelti, 0.3% polivinil formaldehit (triklorometan içinde çözünmüş) çözeltisi, sitokrom c, amonyum asetat, plazmit pBR322.
3. Aletler veya diğer gereçler Sıradan optik mikroskop, bakır ağ, porselen huni, beher, düz tabak, steril büret, steril cımbız, neşter, slaytlar, ** sayma plakası, vakum kaplayıcı, kritik nokta kurutucusu vb.
Operasyon adımları
(I) Örnek hazırlama ve transmisyon elektron mikroskobunun gözlemlenmesi
1. Metal ağın işlenmesi
Optik mikroskopi örnekleri gözlem için slaytlara yerleştirilir. Bununla birlikte, transmisyon elektron mikroskobunda elektronlar cam tabakaya nüfuz edemediğinden, taşıyıcı olarak yalnızca ağ malzemesi kullanılabilir, genellikle taşıyıcı ağ adı verilir. Taşıyıcı ağ, farklı malzeme ve şekillere bağlı olarak birçok farklı spesifikasyona ayrılabilir; bunlardan yaygın olarak kullanılan *, 200-400 ağ (delik sayısı) bakır ağdır. Bakır ağ, üzerindeki kiri çıkarmak ve temiz tutmak için kullanımdan önce işlemden geçirilmelidir, aksi takdirde destekleyici filmin kalitesi ve numune fotoğraflarının netliği etkilenir. Bu deneyde kullanılan bakır ağ 400 ağdır ve şu şekilde işlenebilir: önce amil asetatla birkaç saat ağartın, ardından birkaç kez damıtılmış suyla durulayın ve ardından susuz etanolde birkaç saat ağartın. dehidrasyon. Yukarıdaki yönteme göre bakır ağ hala temiz değilse, 1 ~ 2 dakika içinde daldırılmış konsantre sülfürik asidi (1:1) seyreltmek için kullanılabilir veya birkaç dakika kaynatılmış %1 NaOH çözeltisine daldırılabilir, birkaç kez damıtılmış su ile durulanır. kullanılmak üzere susuz etanol dehidrasyonuna yerleştirildi.
2. Destek filminin hazırlanması
Numune gözleminde, taşıyıcı ağ aynı zamanda yapılandırılmamış, tekdüze bir film tabakası ile kaplanmalıdır, aksi takdirde taşıyıcı ağdaki deliklerden küçük numuneler sızar, bu film tabakasına genellikle destek filmi veya taşıyıcı film denir. Destek filmi elektronlara karşı şeffaf olmalı ve kalınlığı genellikle 20 nm'den az olmalıdır; Elektron ışınının etkisi altında, filmin belirli bir derecede mekanik mukavemete sahip olması, yapının stabilitesini koruyabilmesi ve iyi bir termal iletkenliğe sahip olması gerekir; Ayrıca destek ağının elektron mikroskobu altında görünür bir yapıya sahip olmaması, taşınan numuneyle kimyasal reaksiyona girmemesi, numunenin gözlemlenmesini engellememesi ve kalınlığının genellikle 15 nm civarında olması gerekir. Destek filmi plastik filmden (örn. ateşe dayanıklı pamuk film, polietilen formaldehit film vb.), karbon filmden veya metal filmden (örn. berilyum film vb.) yapılabilir. Rutin çalışma koşullarında ihtiyaçlar bir plastik film ile karşılanabilirken, ateş pamuğu yapışkan filminde plastik filmin hazırlanması nispeten kolaydır ancak mukavemeti polietilen formaldehit film kadar güçlü değildir.
