Mikroskobik Görüntüleme Sınıfı 丨 Geniş Alan Floresan Mikroskobu
Canlı hücre görüntüleme uygulamalarında, geniş alanlı floresan mikroskobu, mikroskop aşamasına yerleştirilmiş belirli çevresel odalarda büyüyen yapışık hücrelerin dinamiklerinin gözlemlenmesini kolaylaştırır. En temel konfigürasyonunda, EPI floresan aydınlatması ile donatılmış standart bir ters doku kültürü mikroskobu, bir alan dizisi dedektör sistemi (genellikle bir CCD kamera), uygun floresan filtreleri ve hücrelerin zararlı Uyarma ışığına aşırı maruz kalmasını sınırlamak için bir kapak sistemi ile birleştirilir. . Temel floresan mikroskobu, yayılan ışığın aydınlatılması ve algılanması için belirli bant genişliklerini seçmek üzere dikkatle eşleştirilmiş girişim filtrelerine dayanır. Işık kaynakları arasında tümü farklı filtre özellikleri gerektiren cıva, ksenon ve metal halojenür ark lambaları, ışın genişleten lazer sistemleri ve ışık yayan diyotlar (LED'ler) bulunur. Floresans mikroskobunda kullanılan sentetik floroforlar, ultraviyole yakın, görünür ve yakın kızılötesi bölgeleri kapsayan emisyon spektrumlarına sahiptir. Genetik olarak kodlanmış flüoresan proteinlerin kullanımı, canlı hücre görüntülemede flüoresans mikroskobunun yeteneklerini büyük ölçüde genişleterek, araştırmacıların ilgilenilen hücre altı bölgeleri tam olarak hedeflemesine izin verdi.
Nuohai tarafından bağımsız olarak geliştirilen yeni bir ışık levhası aydınlatma mikroskobu olan Nuohai LS 18, şeffaf büyük doku örneklerinin yüksek çözünürlüklü 3D görüntülemesi için özel olarak tasarlanmıştır ve beyin, dalak, ince bağırsak gibi çeşitli bozulmamış dokuları keşfetmeye adanmıştır. , böbrek, akciğer, kalp ve tümör. Organların 3D hassas yapısı.
Geniş alan floresansında, mikroskop hedefi tarafından toplanan tam açıklıklı emisyon, gerekli maruz kalma süresini en aza indirirken kaydedilen sinyali en üst düzeye çıkarır. Böylece numuneler çok kısa ışık süreleriyle görüntülenebilir. Geniş alan görüntülemenin ana dezavantajı, arka plan sinyalinin yanı sıra odak düzleminden uzak bölgelerden gelen flüoresansın, genellikle ilgilenilen özellikleri gizleyen istenmeyen ışık olmasıdır. Bu nedenle, geniş alan görüntüleme, ilgilenilen özellikler büyük olduğunda (organeller gibi) veya doğası gereği oldukça noktalı olduğunda en iyi sonuçları verir. Yapışık hücreler, bakteriler, maya ve çok ince doku kesitleri dahil olmak üzere çok çeşitli canlı hücre örnekleri, geniş alan floresan görüntüleme için ideal adaylardır, ancak daha kalın dokular (5 mikronun üzerinde) en iyi şekilde daha gelişmiş görüntüleme yöntemiyle kullanılır.
Sentetik floresan boyalar, kuantum noktaları ve floresan proteinler ile floresan görüntülemede birçok ilerleme olmasına rağmen, bazı durumlarda floresanı diğer görüntüleme yöntemleriyle birleştirmek yararlı olabilir. Örnek olarak, DIC, belirli etiketli hedefler için ilgili fenomenleri incelerken hücre canlılığını ve genel morfolojiyi izlemek için geniş alan floresans ile birlikte kullanılabilir. Tek bir görüntüde DIC ve floresan elde etmek genellikle pratik değildir, ancak uygun şekilde yapılandırılmış bir mikroskopta iki teknik sırayla kullanılabilir. Bu nedenle, epifloresan modunda görüntülemeden sonra, DIC görüntüleri, iletilen ışık kullanılarak floresan etiketli numunelerden elde edilebilir. Analiz sonrası iki görüntü birleştirilebilir. Spektral olarak ayrılmış aydınlatma (görünür ve yakın kızılötesi gibi) ve çift kamera veya bölünmüş görüş kamera adaptörleri kullanan gelişmiş geniş alan mikroskop konfigürasyonlarında DIC ve floresan görüntülerin eş zamanlı olarak alınması mümkündür. Çoğu lazer taramalı konfokal mikroskopta, görüntüler hem floresans hem de DIC modlarında aynı anda elde edilebilir ve bu da alım sonrası işleme ihtiyacını ortadan kaldırır. Faz kontrastı ve Hoffman modülasyon kontrastı, geniş alan floresan mikroskobu ile birlikte de kullanılabilir. Ancak bu tekniklerde objektif lens özeldir, ister bir faz halkası ister bir Hoffman modülasyon plakası olsun, emisyon yoğunluğunda yüzde 5-15'lik bir kayba neden olur.
Makale bağlantısı: Instrument Equipment Network https://www.instrumentsinfo.com/technology/show-1123.html
