Mikrobiyolojik mikroskop doğrudan sayım
deneysel prensip
Hemositometre kullanılarak mikroskop altında doğrudan sayım, yaygın olarak kullanılan bir mikrobiyal sayım yöntemidir. Bu yöntemin avantajı sezgisel ve hızlı olmasıdır. Uygun şekilde seyreltilmiş bakteri süspansiyonunu (veya spor süspansiyonunu) slayt ile hemasitometrenin kapak camı arasındaki sayım bölmesine yerleştirin ve mikroskop altında sayın. Sayım odasının hacmi sabit olduğundan (0.1mm2), mikroskop altında gözlenen mikroorganizma sayısına göre birim hacimdeki toplam mikroorganizma sayısına dönüştürülebilir. Bu yöntem canlı ve ölü bakterilerin toplamını saydığı için toplam bakteri sayımı yöntemi olarak da adlandırılır.
Hemositometre, genellikle üzerinde dört oluğun üç platform oluşturduğu özel bir cam slayttır. Ortadaki platform kısa bir yatay oluk ile ikiye bölünmüştür. Platformun her iki yanında bir ızgara oyulmuştur. Her ızgara dokuz büyük kareye bölünmüştür. Ortadaki büyük kare sayım odasıdır. Mikroorganizmalar sayım odasında sayılır.
Sayım odası ölçeğinin genellikle iki özelliği vardır, birincisi, büyük bir karenin 16 orta kareye bölünmesi ve her bir orta karenin 25 küçük kareye bölünmesidir (Şekil Ⅷ-2); diğeri büyük bir kare Kare 25 orta kareye ve her orta kare 16 küçük kareye bölünmüştür (Şekil Ⅷ-1, C). Ama ne tür bir sayma tahtası olursa olsun, her büyük karedeki küçük karelerin sayısı aynıdır, yani 16×25=400 küçük karedir.
Her büyük karenin kenar uzunluğu 1 mm ve her büyük karenin alanı 1 mm2'dir. Kapak camı kapatıldıktan sonra, sürgülü cam ile kapak camı arasındaki yükseklik 0,1 mm'dir, bu nedenle sayım odasının hacmi 0,1 mm3'tür.
Sayarken, genellikle ortadaki beş karedeki toplam bakteri sayısını sayın, ardından her orta karenin ortalama değerini bulun ve ardından büyük bir karedeki toplam bakteri sayısını elde etmek için 16 veya 25 ile çarpın ve ardından 1 ml bakteri solüsyonundaki toplam bakteri sayısı.
Laboratuvar ekipmanları
Hemositometre, mikroskop, lamel, steril kılcal damar;
Deneysel Malzemeler
Saccharomyces cerevisiae süspansiyonu
Deneysel prosedür (mikrobiyal mikroskop doğrudan sayma yöntemi)
1. seyreltme
Saccharomyces cerevisiae süspansiyonunu uygun şekilde seyreltin. Bakteriyel solüsyon kalın değilse seyreltilmesine gerek yoktur.
2. Mikroskobik sayım odası
Numuneleri eklemeden önce, sayma plakasının sayma odasını mikroskobik olarak inceleyin. Kir varsa saymadan önce temizlenmesi gerekir.
3. numune ekleyin
Temiz ve kuru hemasitometre plakasını bir kapak camıyla kapatın ve ardından steril bir dar ağızlı damlalık kullanarak kapak camının kenarından (çok fazla değil) seyreltilmiş Saccharomyces cerevisiae çözeltisinden küçük bir damla damlatın, böylece bakteri çözeltisi boşluk boyunca boşluğa yakındır. Kılcal ozmoz sayma odasına kendiliğinden girer ve genel sayma odası bakteriyel sıvı ile doldurulabilir. Hava kabarcığı olmamasına dikkat edin.
4. mikroskop sayımı
5 dakika dinlendikten sonra hemasitometreyi mikroskop tablasına yerleştirin, önce sayma odasının yerini bulmak için düşük güçlü bir lens kullanın ve ardından sayım için yüksek güçlü bir lense geçin. Saymadan önce bakteri solüsyonunun çok kalın veya çok ince olduğu bulunursa, saymadan önce seyreltmenin yeniden ayarlanması gerekir. Genel numune seyreltmesi yaklaşık olarak gerektirir
5-10 hücre uygundur. Her sayım odası, saymak için 5 orta ızgaradaki (isteğe bağlı 4 köşe ve merkezi ızgara) bakterileri seçer. Izgara çizgisindeki bakteriler genellikle sadece üst ve sağ çizgilerde sayılır. Maya tomurcuklanması durumunda, tomurcuk gövdesinin boyutu ana hücrenin yarısına ulaştığında iki bakteri sayın. İki sayma odasında sayılan değerlerden numunenin bakteri içeriğini hesaplamak için bir numune sayın.
5. Hemositometrenin Temizlenmesi
Kullandıktan sonra kan hücresi sayma plakasını su jeti ile muslukta durulayın, sert cisimlerle yıkamayın ve yıkadıktan sonra kendiniz veya saç kurutma makinesi ile kurutun. Mikroskobik inceleme, her hücrede kalıntı bakteri veya başka tortu olup olmadığını gözlemleyin. Temiz değilse, temiz olana kadar defalarca yıkanmalıdır.
