Lazer Eş Odaklı Mikroskop Özellikleri ve Uygulamaları
Normal bir mikroskopta gözlemin görüntü düzlemi, objektif merceğin odak düzleminin detektör ile üst üste gelmesiyle komşu eksenel düzlemlerden izole edilirken, eş odaklı bir mikroskopta bu izolasyon, numunenin kırınımla sınırlı bir nokta ile aydınlatılmasıyla elde edilir. Bu izolasyonu sağlamak ve böylece çözünürlüğü artırmak için, ışığın bu noktasının eşlenik odağında toplanan ışığın yolunda bir iğne deliği kullanarak başıboş ışığı filtreleyin.
Yalnızca eşlenik numune katmanından geri yansıyan ışık, toplama ışık yolundaki iğne deliğinden geçebilirken ilgisiz numune katmanı yansımalarının geri kalanı iğne deliği tarafından engellenir. Bu, çözünürlükte önemli bir artış sağlar. Aşağıda aynı kalın numunenin çok boyutlu floresan mikroskobu ve konfokal mikroskopisinin yan yana karşılaştırması gösterilmektedir. Farklı odak düzlemlerinde bir dizi görüntü alındığında, genellikle "z yığını" olarak adlandırılan, eş odaklı mikroskopi tarafından sağlanan çözünürlük ve kontrast kazanımlarını ve bu kazanımların altında yatan nedenleri gösteren bir görüntü üretilir. Görüntüleme düzleminin doku üzerinde olduğu yığının tepesindeki görüntü incelendiğinde, floresans görüntüsünde büyük miktarda dağınık ışığın ortaya çıktığı, buna karşılık eş odaklı mikroskop görüntüsünün siyah göründüğü görülebilir. Eksenel yönde PSF'deki bu azalma, z yığınının ortasındaki optik arayüzde gözlemlenen çözünürlük farkına doğrudan katkıda bulunur.
Optik dilim taramalı görüntüleme
Lazer taramalı konfokal mikroskopinin bir diğer özelliği de taramalı görüntüleme tekniği olmasıdır. Geleneksel geniş alan aydınlatma teknikleri, görüntünün doğrudan çıplak gözle veya bir detektör tarafından yakalanabileceği şekilde tüm numuneyi aydınlatır, ancak LSCM, numuneyi taramak için bir veya daha fazla odaklanmış ışık huzmesi kullanır, böylece ortaya çıkan görüntüye ışık denir. aşağıdaki diyagramda gösterildiği gibi optik dilim. Geleneksel geniş alan aydınlatması ile lazer taramalı eş odaklı aydınlatma arasındaki fark aşağıda gösterilmiştir.
Bu nedenle aşağıdaki şekilde modern eş odaklı mikroskopinin pratik bir yolu gösterilmektedir. Lazerden gelen uyarım ışığı dikroik bir aynadan geçirilir ve numunenin x yönünde ve y yönünde bir çift galvanometre aynası aracılığıyla taranır ve numunenin uyarılması (veya yansıması) bir iğne deliğinden PMT'ye geçer. Dedektör kaydedilecek ve kaydedilen taranmış görüntü, numunenin gerçek görüntüsünü oluşturmak üzere bir bilgisayar tarafından yeniden oluşturulacak.
