Multifoton Lazer Taramalı Mikroskopların Avantaj ve Dezavantajlarına Giriş
Multifoton lazer tarama mikroskobunun avantajları:
1. Kırmızı veya kızılötesi ışıkla uyarılan ışık saçılımı küçüktür ve küçük parçacıkların saçılması, dalga boyunun dördüncü kuvvetiyle ters orantılıdır.
2. Görüntüleme kesitinden daha fazla saçılmış foton-iğne deliklerine gerek kalmadan toplanabilir.
3. İğne delikleri, odaklanmamış veya odaklanmış alanlardan yayılan dağınık fotonları ayırt edemez ve çoklu fotonlar, derin görüntülemede daha iyi sinyal-gürültü- oranına sahiptir.
4. Tek foton uyarımı için kullanılan ultraviyole veya görünür ışık, ışın odak düzlemine ulaşmadan önce örnek tarafından kolayca emilir ve zayıflatılır, bu da derin katmanların uyarılmasını zorlaştırır.
5. Biyolojik mikroskopi gözlemi açısından ilk husus, organizmanın aktif durumuna zarar vermemek, su, iyon konsantrasyonu, oksijen ve besinlerin dolaşımını sürdürmektir. Işık gözlemi alanında hem termal hem de foton enerjisinin ışınlama dozu içerisinde kalması ve hücrelere zarar vermeyen ışık enerjisinin olması gerekmektedir.
6. Multifoton mikroskobunun birçok avantajı vardır. Üç-boyutlu çözünürlük, derinlik istilası, saçılma verimliliği, arka plan ışığı, sinyal-gürültü oranı{-, kontrol vb. açısından, önceki lazer mikroskopların sahip olmadığı veya geçemeyeceği özellikler vardır.
Multifoton lazer tarama mikroskobunun dezavantajları:
1. Yalnızca floresans görüntüleme için.
2. Numunenin uyarım ışığını emebilen kromoforlar içermesi durumunda numune termal hasara maruz kalabilir.
3. Çözünürlük biraz azalır, ancak aynı odaklı küçük deliklerin aynı anda kullanılmasıyla iyileştirilebilmesine rağmen sinyal kaybı olur.
4. Pahalı ultra hızlı lazerlerin sınırlamaları nedeniyle, multifoton taramalı mikroskopların maliyeti nispeten yüksektir.
