Geliştirilmiş Lazer Taramalı Multifoton Mikroskobunun Faydaları
Lazer taramalı multifoton mikroskobu, esas olarak canlı hücrelerin, sabit hücrelerin ve dokuların derin yapısını gözlemlemek için optik mikroskopide önemli bir gelişmedir ve net ve keskin çok katmanlı Z-düzlemi yapıları, yani optik dilimler elde edebilir ve oluşturabilir. Numunenin üç boyutlu katı yapısı. Konfokal mikroskop, objektif merceğin tüm arka odak düzlemini dolduracak şekilde genişletilen ve daha sonra objektif merceğin mercek sistemi aracılığıyla numunenin odak düzlemi üzerinde çok küçük bir noktaya yaklaşan bir lazer ışık kaynağı kullanır. Objektif merceğin sayısal açıklığına bağlı olarak, en parlak aydınlatma noktasının çapı yaklaşık 0,25 ~ 0,8 μm ve derinlik yaklaşık 0,5 ~ 1,5'tir. μm. Konfokal noktanın boyutu mikroskobun tasarımına, lazer dalga boyuna, objektif merceğin özelliklerine, tarama ünitesinin durum ayarına ve numunenin doğasına bağlıdır. Alan mikroskopları geniş bir aydınlatma aralığına ve derinliğine sahipken, eş odaklı mikroskoplar, odak düzlemindeki bir odak noktasına yoğunlaşan aydınlatmaya sahiptir. Eş odaklı mikroskopinin en temel avantajı, kalınlığı yaklaşık 0,5 ila 1,5 μm olan kalın floresan numunelerin (50 μm'ye kadar veya daha fazla) ince optik kesitlerini gerçekleştirebilmesidir. Numuneyi mikroskop Z ekseni step motoruyla yukarı ve aşağı hareket ettirerek bir dizi optik kesit görüntüsü elde edilebilir. Görüntü bilgilerinin edinilmesi kesin bir düzlem dahilinde kontrol edilir ve numunenin diğer konumlarından gelen sinyaller tarafından etkilenmez. Arka plan floresansının etkisi kaldırıldıktan ve sinyal-gürültü oranı artırıldıktan sonra, konfokal görüntülerin kontrastı ve çözünürlüğü, geleneksel alan aydınlatmalı floresan görüntülerle karşılaştırıldığında önemli ölçüde iyileştirilir. Pek çok örnekte, birçok karmaşık yapısal bileşen karmaşık sistemler oluşturacak şekilde iç içe geçmiş durumdadır, ancak yeterli sayıda optik bölüm toplandıktan sonra bunları yazılım aracılığıyla 3 boyutlu olarak yeniden yapılandırabiliriz. Bu deneysel yaklaşım, biyolojik araştırmalarda hücreler veya dokular arasındaki karmaşık yapısal ve fonksiyonel ilişkileri açıklamak için yaygın olarak kullanılmaktadır.
