Floresan mikroskobunun parlak ve karanlık alanları için görüntüleme yöntemleri
(1) Yalnızca paraksiyel bölgedeki iletilen elektronların objektif açıklıktan geçmesine izin vererek parlak bir arka plan üzerinde karanlık bir görüntü oluşturan parlak alan görüntüleme (BFI). Objektif merceğin açıklığı ne kadar küçük olursa, parlak alan görüntüsünün kontrastı da o kadar büyük olur; (2) Karanlık alan görüntüleme (DFI), iletilen ışını bloke ederken geniş açılı saçılmış ışının veya bir kristalin kırınım ışınının yalnızca bir kısmının objektif lens açıklığından geçmesine izin verir. Bu, karanlık bir arka plan üzerinde parlak bir grafik görüntü oluşturur. Bu karanlık alan görüntüleme yöntemi, görüntülerin kontrastını artırabilir ve önemli bir görüntüleme yöntemidir.
Karanlık alan görüntülemeyi elde etmek için floresan mikroskobu için kabaca dört yöntem vardır: (1) objektif açıklığı hareket ettirirken optik eksen boyunca dikey aydınlatmayı korumak; (2) Optik eksen yönünde dağınık ışınlar elde etmek için eğik aydınlatmanın kullanılmasına Merkezi Karanlık Alan Görüntüleme (CDFI) adı verilir; (3) Merkezi ışın blokajı ve dairesel şeffaf alanı olan bir objektif mercek açıklığı; (4) Işığı tespit etmek için dairesel şeffaf bir spot ışığı ve merkezi dairesel delikli bir objektif açıklığı kullanın. Buradaki * yöntemler basit ve kullanışlıdır, ancak uzak kol bölgesinde elektronik görüntüleme kullanırlar, bu da büyük sapmalara ve düşük görüntü kalitesine neden olur. İkinci yöntem yukarıdaki dezavantajları ortadan kaldırabilir, ancak Leica floresans mikroskobunun objektif açıklığı, dağınık kırınıma uğramış elektronların yalnızca küçük bir kısmını alır ve bu da daha düşük verimle sonuçlanır. Açıklığın tarafı genellikle çok sayıda elektron tarafından bombalanır, bu da kolayca asimetrik kirliliğe neden olabilir ve görüntü kalitesini etkileyebilir. Dairesel amaç bu bağlamda geliştirilmiştir ancak dezavantajı, yapılmasının zor olması ve tam eksenel simetriye ulaşmanın zor olmasıdır. Aydınlatma sistemi için nispeten rahat gereksinimler göz önüne alındığında, numune için içi boş aydınlatma sağlamak üzere yoğunlaştırıcıya dairesel bir açıklık eklenmesini içeren ikinci çözüm benimsenebilir. Bu cihazın etkisi. Görüntü çözünürlüğü parlak alan görüntülerine yakın olabilirken, kontrast da büyük ölçüde iyileştirilmiştir.
