Doğru Floresan Mikroskobu Nasıl Seçilir
Floresan mikroskop, laboratuvarlar ve patoloji bölümleri için standart bir mikroskobik görüntüleme ekipmanıdır. Gözlem ve görüntüleme için floresan özelliklerini kullanır. Hücre biyolojisi, nörobiyoloji, botanik, mikrobiyoloji, patoloji, genetik ve diğer alanlarda yaygın olarak kullanılmaktadır. Floresan görüntüleme, yüksek hassasiyet ve yüksek özgüllük avantajlarına sahiptir ve belirli proteinlerin ve organellerin doku ve hücrelerdeki dağılımının gözlemlenmesi, kolokalizasyon ve etkileşim çalışması, iyon konsantrasyonu değişiklikleri gibi yaşam dinamik süreçlerinin izlenmesi için çok uygundur. , vesaire.
Mikroskop Seçimi
Floresan mikroskoplar temel olarak üç kategoriye ayrılır: dikey floresan mikroskoplar (kesitlemeye uygun), ters floresan mikroskoplar (kesitleme dikkate alındığında canlı hücreler için uygundur), stereoskopik floresan mikroskoplar (bitkiler, zebra balığı (yetişkin/yetişkin/yetişkin) gibi daha büyük örnekler için uygundur) embriyo), medaka, fare/sıçan organları vb.).
Floresan Filtre Küplerinin Seçimi
Floresan probların uyarım ve emisyon dalga boylarının dikkate alınmasına ek olarak, filtre bloklarının seçiminde çok renkli etiketli numuneler için spesifik olmayan uyarım ve çapraz renk olup olmadığının da dikkate alınması gerekir. Deneyde, uyarma için uyarma zirvesine en yakın dalga boyunu seçmeye çalışacağız ve alıcı aralığı emisyon tepe noktasını içermelidir. Örneğin, Alexa Fluor 488'in uyarma zirvesi 500nm'dir ve bir floresan mikroskobunda 480/40 uyarma filtresi seçilebilir. Floresan mikroskoplarında yaygın olarak kullanılan floresan filtre küpleri, yine ihtiyaca göre seçilmesi gereken uzun geçiş (kısa için LP) ve bant geçiren (kısaca BP) olmak üzere iki türe ayrılabilir.
Floresan ışık kaynağı seçimi
Günümüzde yaygın olarak kullanılan floresan ışık kaynakları arasında son yıllarda hızla gelişen cıvalı lambalar, metal halide lambalar ve LED ışık kaynakları bulunmaktadır. Floresan ışık kaynağının spektrumu sürekli ve süreksizdir ve enerji farklı bantlarda farklı olacaktır. Nispeten dar spektral bandı, daha kararlı enerji çıkışı, uzun ömrü, güvenlik ve çevre koruması ve diğer birçok avantajı nedeniyle, LED ışık kaynağı yavaş yavaş floresan mikroskobunun ana ışık kaynağı haline geliyor.
konfokal mikroskop
Geleneksel floresan mikroskobu gözleminde, floresan işaretleyici maddelerin ve otofloresan yapılarının üst üste binmesi nedeniyle, bunlar yakın bir şekilde birleştirilirken, geleneksel epi-floresan mikroskobu objektif lensi yalnızca odak düzleminden gelen ışığı toplamakla kalmaz, aynı zamanda yukarıdan ve aşağıdan saçılan ışığı da toplar. odak düzlemi , büyük ölçüde azaltılmış görüntü çözünürlüğü ve kontrast ile sonuçlanır.
Konfokal görüntüleme, ışığın yalnızca odak düzleminden yansıyan kısmını saptayarak bu sorunu çözer. Işık kaynağı, odak düzleminde küçük ve ince bir ışık noktası oluşturmak için bir iğne deliğinden geçer. Odak düzleminden yayılan ışık objektif merceği tarafından toplanır. Objektif merceğin odak düzleminin üstündeki veya altındaki noktadan yayılan flüoresansın çoğu küçük deliğe yakınsamaz. Yalnızca odak düzleminde bulunan floresan ve odak dışı floresansın küçük bir kısmı iğne deliğinden geçebilirken, odak düzlemi dışındaki ışık huzmeleri iğne deliği plakasının önünde veya arkasında birleşir ve dedektöre girmeleri engellenir. iğne deliği Algılanan görüntü, odak düzleminden gelen görüntüdür, bu nedenle nihai görüntü kalitesi büyük ölçüde iyileştirilir.
Lazer taramalı konfokal mikroskobun fonksiyonlarının avantajları ve uygulanabilirliği nedeniyle konfokal mikroskop, yüksek hassasiyetli hücre biyolojisi, botanik ve hücre araştırmaları alanında vazgeçilmez bir deneysel yardımcıdır. Aynı zamanda geleceğin bilimsel araştırma merkezinde en temel ve çekirdek bilimsel araştırma aracı olacaktır.
