Floresan mikroskobu ile ilgili bilgi
Konfokal floresan mikroskobunun temel prensibi: numuneyi ışınlamak için bir nokta ışık kaynağı kullanılır ve odak düzleminde iyi tanımlanmış küçük bir ışık noktası oluşturulur. bölücülerden oluşur. Işın ayırıcı, floresanı doğrudan dedektöre gönderir. Işık kaynağının ve dedektörün önünde sırasıyla aydınlatma iğne deliği ve algılama iğne deliği olarak adlandırılan bir iğne deliği vardır. İkisinin geometrik boyutu aynıdır, yaklaşık 100-200nm; odak düzlemindeki ışık noktasına göre, ikisi eşleniktir, yani ışık noktası bir dizi mercekten geçer ve son olarak aynı anda aydınlatma iğne deliğine ve algılama iğne deliğine odaklanabilir. Bu şekilde, odak düzleminden gelen ışık, algılama deliği kapsamında birleştirilebilirken, odak düzleminin üstünden veya altından saçılan ışık, algılama deliğinin dışında bloke edilir ve görüntülenemez. Lazer, numuneyi nokta nokta tarar ve iğne deliğini tespit ettikten sonra foto çoğaltıcı tüp, aynı zamanda, dijital bir sinyale dönüştürülen ve bilgisayara iletilen ve son olarak bir araya toplanan, nokta nokta ilgili ışık noktasının konfokal görüntüsünü elde eder. ekranda tüm odak düzleminin konfokal görüntüsü.
Her bir odak düzlemi görüntüsü aslında numunenin optik bir kesitidir ve bu optik kesit her zaman belirli bir kalınlığa sahiptir ve optik ince kesit olarak da bilinir. Odak noktasındaki ışık yoğunluğu odak olmayan noktadakinden çok daha büyük olduğundan ve odak dışı düzlem ışığı iğne deliği tarafından filtrelendiğinden, konfokal sistemin alan derinliği yaklaşık olarak sıfırdır ve Z boyunca tarama yapar. -eksen, numunenin odaklanmış noktasında iki boyutlu optik bölümü gözlemleyerek optik tomografiyi gerçekleştirebilir. XY düzlemi (odak düzlemi) taraması ile Z ekseni (optik eksen) taraması birleştirildiğinde, sürekli katmanların iki boyutlu görüntülerinin biriktirilmesiyle numunenin üç boyutlu görüntüsü elde edilebilir ve özel bilgisayar yazılımı ile işlenebilir.
Yani, algılama iğne deliği ve ışık kaynağı iğne deliği her zaman aynı noktaya odaklanır, böylece odak düzleminin dışında uyarılan flüoresan tespit iğne deliğine giremez.
Lazer konfokalın çalışma prensibinin basit ifadesi, ışık kaynağı olarak lazer ışığını kullanmasıdır. Geleneksel floresan mikroskop görüntüleme temelinde, bir lazer tarama cihazı ve bir eşlenik odaklama cihazı ekler ve bilgisayar kontrolü yoluyla dijital görüntü elde etme ve işleme için bir sistemdir.
