Mikrobiyal mikroskopi doğrudan sayma yönteminin deneysel prensipleri
Hemasitometre kullanılarak mikroskop altında doğrudan sayım, mikroorganizmaların sayılmasında yaygın olarak kullanılan bir yöntemdir. Bu yöntemin avantajı sezgisel ve hızlı olmasıdır. Uygun şekilde seyreltilmiş bakteri süspansiyonunu (veya spor süspansiyonunu) slayt ile hemasitometrenin lameli arasındaki sayım bölmesine yerleştirin ve mikroskop altında sayın. Sayma odasının hacmi sabit (0.1 mm2) olduğundan, mikroskop altında gözlenen mikroorganizma sayısına göre birim hacim başına düşen toplam mikroorganizma sayısına dönüştürülebilmektedir. Bu yöntem canlı ve ölü bakterilerin toplam sayısını saydığından toplam bakteri sayımı yöntemi olarak da adlandırılır.
Bir hemasitometre genellikle üç platform oluşturan dört yuvalı özel bir slayttır. Orta platform kısa bir yatay oluk ile ikiye bölünmüştür. Platformun her iki yanında oyulmuş kare bir ızgara bulunmaktadır. Her kare ızgara dokuz büyük kareye bölünmüştür. Ortadaki büyük kare sayım odasıdır. Mikroorganizmaların sayımı sayım odasında gerçekleşir. Hemasitometrenin yapısı Şekil Ⅷ-1'da gösterilmektedir.
Sayım odasının ölçeği genellikle iki özelliğe sahiptir. Biri, 16 orta boy kareye bölünmüş büyük bir karedir ve her orta kare, 25 küçük kareye bölünmüştür (Şekil Ⅷ-2); diğeri ise büyük bir kare. Kare ızgara 25 orta boy kareye bölünmüştür ve her orta kare 16 küçük kareye bölünmüştür (Şekil VIII-1, C). Ancak ne tür bir sayma tahtası olursa olsun, Şekil Ⅷ-2'da gösterildiği gibi her büyük karedeki küçük karelerin sayısı aynıdır, yani 16×25=400 küçük kare.
Her büyük karenin kenar uzunluğu 1 mm olduğundan her büyük karenin alanı 1 mm2 olur. Kapak camı kapatıldıktan sonra slayt ile kapak camı arasındaki yükseklik 0,1 mm olur, dolayısıyla sayma bölmesinin hacmi 0,1 mm3 olur.
Sayarken, genellikle beş orta karedeki toplam bakteri sayısını sayın, ardından her orta karenin ortalama değerini bulun ve ardından büyük bir karedeki toplam bakteri sayısını bulmak için 16 veya 25 ile çarpın ve ardından şunu hesaplayın: 1 ml bakteri çözeltisindeki toplam bakteri sayısı.
