Multifoton Lazer Tarama Mikroskobunun Faydalarını Artırma
Lazer taramalı multifoton mikroskobu, optik mikroskopiye göre büyük bir gelişmedir. Canlı hücrelerin, sabit hücrelerin ve dokuların derin yapısını gözlemleyebilir ve numunenin üç boyutlu katı yapısını oluşturabileceği net ve keskin çok katmanlı Z düzlemi yapıları, yani optik kesitler elde edebilir. Konfokal mikroskopi, genişledikten sonra objektif merceğin tüm arka odak düzlemini dolduran ve daha sonra numunenin odak düzlemi üzerinde çok küçük bir noktaya yaklaşmak üzere objektif merceğin mercek sisteminden geçen bir lazer ışık kaynağı kullanır. Objektif merceğin sayısal açıklığına bağlı olarak, en parlak aydınlatma noktasının çapı yaklaşık 0,25 ~ 0,8μm ve derinliği yaklaşık 0,5 ~ 1,5μm'dir. . Konfokal noktanın boyutu mikroskop tasarımına, lazer dalga boyuna, objektif lens özelliklerine, tarama ünitesi durum ayarlarına ve numune özelliklerine bağlıdır. Bir alan mikroskobunun aydınlatma aralığı ve aydınlatma derinliği genişken, eş odaklı bir mikroskobun aydınlatması, odak düzlemindeki hassas bir odaklanmaya odaklanır. Eş odaklı mikroskopinin en temel avantajı, kalın floresan numunelerin (50 μm veya daha fazlasına ulaşabilen) ince optik kesitlerini gerçekleştirebilmesi ve dilimlerin kalınlığının yaklaşık 0,5 ila 1,5 μm olmasıdır. Gelişmiş bir mikroskop Z ekseni step motoru kullanılarak numunenin yukarı ve aşağı hareket ettirilmesiyle seri optik kesit görüntüleri elde edilebilir. Görüntü bilgilerinin toplanması, numunenin diğer konumlarından yayılan sinyallere müdahale edilmeden hassas bir düzlemde kontrol edilir. Arka plan floresansının etkisi kaldırıldıktan ve sinyal-gürültü oranı artırıldıktan sonra, konfokal görüntülerin kontrastı ve çözünürlüğü, geleneksel alan aydınlatmalı floresan görüntülere kıyasla önemli ölçüde iyileştirilir. Pek çok örnekte, birçok karmaşık yapısal bileşen karmaşık sistemler oluşturacak şekilde iç içe geçmiştir, ancak yeterli sayıda optik bölüm toplandığında bunları yazılım aracılığıyla üç boyutlu olarak yeniden yapılandırabiliriz. Bu deneysel yöntem, biyolojik araştırmalarda hücreler veya dokular arasındaki karmaşık yapısal ve fonksiyonel ilişkileri açıklamak için yaygın olarak kullanılmaktadır.
