Lazer taramalı multifoton mikroskobunun faydalarını arttırmak
Lazer taramalı multifoton mikroskobu, optik mikroskopiye göre büyük bir gelişmedir. Canlı hücrelerin, sabit hücrelerin ve dokuların derin yapısını gözlemleyebilir ve numunenin üç boyutlu katı yapısını oluşturabileceği net ve keskin çok katmanlı Z düzlemi yapıları, yani optik kesitler elde edebilir. Konfokal mikroskopi, genişledikten sonra objektif merceğin tüm arka odak düzlemini dolduran ve daha sonra numunenin odak düzlemi üzerinde çok küçük bir noktaya yaklaşmak üzere objektif merceğin mercek sisteminden geçen bir lazer ışık kaynağı kullanır. Objektif merceğin sayısal açıklığına bağlı olarak, en parlak aydınlatma noktasının çapı yaklaşık 0,25 ~ 0,8μm ve derinlik yaklaşık 0,5 ~ 1,5μm'dir. . Konfokal noktanın boyutu mikroskop tasarımına, lazer dalga boyuna, objektif lens özelliklerine, tarama ünitesi durum ayarlarına ve numune özelliklerine bağlıdır. Alan mikroskobu geniş bir aydınlatma aralığına ve derinliğe sahipken, eş odaklı mikroskopi, odak düzlemindeki bir odak noktasına odaklanmış odaklanmış bir aydınlatmaya sahiptir. Eş odaklı mikroskopinin en temel avantajı, kalın floresan numunelerin (50 μm veya daha fazlasına ulaşabilen) ince optik kesitlerini alabilmesi ve kesitlerin kalınlığının yaklaşık 0,5 ila 1,5 µm olmasıdır. Mikroskobun Z ekseni step motorunu kullanarak numuneyi yukarı ve aşağı hareket ettirerek bir dizi optik kesit görüntüsü elde edilebilir. Görüntü bilgilerinin edinilmesi düzlem içinde kontrol edilir ve numunenin diğer konumlarından yayılan sinyaller tarafından etkilenmez. Arka plan floresansının etkisi kaldırıldıktan ve sinyal-gürültü oranı artırıldıktan sonra, konfokal görüntülerin kontrastı ve çözünürlüğü, geleneksel alan aydınlatmalı floresan görüntülere kıyasla önemli ölçüde iyileştirilir. Pek çok örnekte, birçok karmaşık yapısal bileşen karmaşık sistemler oluşturacak şekilde iç içe geçmiştir, ancak yeterli sayıda optik bölüm toplandığında bunları yazılım aracılığıyla üç boyutlu olarak yeniden yapılandırabiliriz. Bu deneysel yöntem, biyolojik araştırmalarda hücreler veya dokular arasındaki karmaşık yapısal ve fonksiyonel ilişkileri açıklamak için yaygın olarak kullanılmaktadır.
