Floresan mikroskobu ile sıradan optik mikroskop arasındaki fark
Floresan mikroskobu ve sıradan optik mikroskop farkı, floresan mikroskobu ve sıradan optik mikroskop farklıdır, numuneyi gözlemlemek için sıradan ışık kaynağının aydınlatılmasıyla değil, belirli bir dalga boyunda ışığın (genellikle ultraviyole, mavi-mor) kullanılmasıyla yapılır. Numunenin floresan malzeme içinde mikroskop altında uyarılması, böylece floresan ışık yayar, bu nedenle floresan mikroskobunun ışık kaynağındaki rolü doğrudan bir aydınlatma değil, iç floresans örneklerinin bir tür uyarılmasıdır. Floresan mikroskobun kaynağı doğrudan bir aydınlatma değil, numunenin içindeki floresan maddeyi uyaracak bir enerji kaynağı olarak kullanılır. Numuneyi gözlemleyebilmemizin nedeni, ışık kaynağının aydınlanmasından değil, numunedeki floresan maddenin uyarılmış ışık enerjisini emdikten sonra sunduğu floresans olgusundan kaynaklanmaktadır. Floresan mikroskobunun özelliklerinin esas olarak, ışık kaynağının çok sayıda spesifik dalga boyu aralığını uyarma ışığı sağlayabilmesi ve böylece incelenen numune içindeki floresan maddelerin gerekli uyarma ışığı yoğunluğunu elde edebilmesi olduğu görülebilir. Aynı zamanda floresan mikroskobunun uygun bir filtre sistemine sahip olması gerekir. Floresan mikroskobu **floresan histokimyası için temel araçtır. Ultra yüksek basınçlı ışık kaynağı, filtre sistemi (uyarma ve bastırma filtre plakası dahil), optik sistem ve fotoğraf sistemi ve diğer ana bileşenlerden oluşur, numuneyi floresans yaymaya teşvik etmek için belirli bir dalga boyunun kullanılmasıdır.
1. floresan uyarma yolu: ışığın dalga boyu aralığına göre UV uyarma yöntemine (ultraviyole aydınlatma kullanılarak) ve BV uyarma yöntemine (mavi mor ışık kullanılarak) ayrılır, iki tür UV uyarma yöntemi ultraviyole ışığın yakınında 400 nm'den daha kısadır. heyecan. Bu yöntemde görünür bir uyarma ışığı yoktur, bu nedenle gözlemlenen floresans, boyanın doğal floresansını gösterir ve numune üzerindeki spesifik floresansı, arka plan dokusunun kendi kendine floresansından ayırt etmek kolaydır.
2. BV uyarma yöntemi: Yöntem, uyarma için ultraviyoleden mavi ışığa 404 nm, 434 nm'yi merkeze alır. Bu yöntem, numuneyi ışınlamak için mavi ışık kullanır, bu nedenle floresans gözlem sisteminin kesme filtresinin, mavi ışığı tamamen engelleyebilecek ve istenen yeşil ve sarı floresanı tamamen geçirebilecek bir filtre kullanması gerekir. Floresan antikor yöntemi için floresan pigmentler. Uyarma ışığının maksimum absorpsiyonunun dalga boyu ile floresansın maksimum emisyonunun dalga boyu birbirine yakın olduğundan, BV uyarma yönteminde kullanılan filtrelerin keskin kesici filtreler olması gerekir. Bu yöntem, uyarı ışığı olarak mavi ışık kullanır, böylece florokromun emme verimliliği daha yüksek olur ve daha parlak bir görüntü elde edilebilir. Dezavantajı ise 500 nm'nin altındaki floresansın görülememesi, 500 nm'nin üzerinde ise görüntünün tamamının sarı görünmesidir. Floresan antikor yönteminde, özgüllüğün çoğu, florokroma özgü renk ile değerlendirilir; bu nedenle, yukarıda açıklanan BV uyarma yönteminin dezavantajları, ince özgüllük tartışılırken son derece etkili olma eğilimindedir.
