Mikrobiyal popülasyonun belirlenmesi - doğrudan mikroskobik sayma yöntemi!
I. Amaç Gereksinimleri
1, Hematokrit plaka sayımının prensibini açıklığa kavuşturmak.
2, Hematokrit plakasını kullanarak mikrobiyal sayma yönteminde ustalaşın.
II. Temel prensipler
Mikroskopla doğrudan sayma yöntemi, test edilecek numunenin küçük bir miktarının belirli bir alan ve hacme sahip özel bir slayt üzerinde süspansiyon haline getirilmesi (bakteriyolojik sayaç olarak da bilinir), basit, hızlı, sezgisel bir yöntemle mikroskopta doğrudan sayılmasıdır. Şu anda yerli ve yabancı yaygın olarak kullanılan bakteriyolojik sayaçlar şunlardır: maya, bakteri, küf sporları ve diğer sayma süspansiyonları için kullanılabilen kan hücresi sayma plakası, Peteroff-Hauser bakteriyolojik sayaçları ve Hawksley bakteriyolojik sayaçları vb., temel prensip aynı. Son iki tip sayacın lamel yerleştirildikten sonra toplam hacmi 0.02mm3'tür ve lamel ile taşıyıcı dilim arasındaki mesafe yalnızca 0,02 mm'dir, dolayısıyla aşağıdaki gibi daha küçük hücreler vardır: bakteriler yağa batırma objektifiyle gözlemlenebilir ve sayılabilir. Bu sayaçların kullanımının yanı sıra, genellikle inek sütünün bakteriyolojik incelemesinde kullanılan, mikroskop altında doğrudan gözlenen yayma alanının görüş alanı alanına oranının tahmin edilmesi yöntemi de bulunmaktadır. Doğrudan mikroskop sayma yönteminin avantajları sezgisel, hızlı ve kullanımı kolaydır. Ancak bu yöntemin dezavantajı, sonucun genellikle ölü ve canlı organizmaların toplamı olmasıdır. Bu dezavantajın üstesinden gelmek için canlı bakteri lekeli mikro hazne kültürünün kombinasyonu (kısa süreli) ve sadece canlı organizmaları sayma amacına ulaşmak için sitokinez inhibitörlerinin eklenmesi gibi bazı yöntemler vardır.
Operasyon adımları
1, Bakteriyel süspansiyon hazırlığı
Uygun konsantrasyonda bira mayasının bakteriyel süspansiyonunu yapmak için steril salin kullanın.
2, Ayna sayma odası
Numuneleri eklemeden önce sayım plakasının sayım bölmesi incelenmelidir. Kir varsa saymadan önce temizlenmesi ve kurutulması gerekir.
3, Örnek ekleme
Bir lamel ile kaplanmış kan hücresi sayma plakasını temizleyin ve kurutun ve ardından bira mayası süspansiyonunu lamelin kenarından sallayarak küçük bir damla damlatmak için steril bir kılcal büret kullanın, böylece bakteriyel sıvı boşluk boyunca kılcal penetrasyon yoluyla lamel içine girer. sayma odası otomatik olarak, sayma odası genellikle bakteriyel sıvı ile doldurulabilir. Örnek alırken öncelikle bakteri solüsyonu iyice çalkalanmalıdır; Numuneleri eklerken sayma odasında hava kabarcığı olmamalıdır.
4, Mikroskop sayımı
Numuneyi ekledikten sonra 5 dakika dinlenmeye bırakın, ardından kan hücresi sayma plakasını mikroskop taşıyıcı tablasına koyun, önce düşük büyütmeli sayma odasının yerini bulun ve ardından sayma için yüksek büyütmeye değiştirin. Mikroskobun ışığının yoğunluğunu uygun şekilde ayarlayın, çünkü reflektörlü bir ışıkla mikroskop aynı zamanda ışığın bir tarafa önyargılı olmamasına da dikkat etmelidir, aksi takdirde görüş alanı sayma odası ızgara çizgisini temizlemek kolay değildir veya yalnızca dikey çizgiyi veya yalnızca yatay çizgiyi görün. Sayım öncesinde bakteriyel sıvının çok kalın ya da çok ince olduğu tespit edilirse, sayım öncesinde seyreltmenin yeniden ayarlanması gerekir. Her hücrede yaklaşık 5 ila 10 bakterinin bulunduğu genel numune seyreltme gereklilikleri uygundur. Her sayım odası için, 5 orta bölmedeki (4 köşe ve merkezde bir orta bölme) organizmalar sayılmak üzere seçilir. Izgara çizgilerinde yer alan organizmalar genellikle yalnızca üst ve sağ çizgilerde sayılır. Maya tomurcuklanması durumunda, tomurcuklanan gövde ana hücrenin yarısı büyüklüğüne ulaştığında iki organizma olarak sayılır. Numunenin bakteri içeriğini hesaplamak için iki sayım odasından bir numunenin ortalama değerde sayılması.
5. Hematokrit plakasının temizlenmesi
Kullandıktan sonra kan hücresi sayma plakasını musluk altında suyla durulayın, yıkamak ve fırçalamak için sert nesneler kullanmayın, kendiniz kurutun veya yıkadıktan sonra saç kurutma makinesi kullanarak kurutun. Her bölmede herhangi bir kalıntı organizma veya başka çökelti olup olmadığını görmek için plakayı mikroskobik olarak inceleyin. Temiz değilse temizlenene kadar yıkama tekrarlanmalıdır.
