Konfokal mikroskop ile sıradan optik mikroskobun karşılaştırılması
Mikroskop hücreleri gözlemlemek için ana araçtır. Işık kaynağına bağlı olarak iki kategoriye ayrılabilir: optik mikroskop ve elektron mikroskobu. İlki, ışık kaynağı olarak görünür ışığı (ultraviyole mikroskobundan ultraviyole ışığa) kullanırken, ikincisi, ışık kaynağı olarak bir elektron ışınını kullanır. Sıradan optik mikroskop ve lazer konfokal mikroskop aynı optik mikroskoba aittir.
I. Genel Optik Mikroskop
Sıradan biyolojik mikroskop üç bölümden oluşur: ① ışık kaynağı ve yoğunlaştırıcı dahil aydınlatma sistemi; ② Hedeflerden ve göz merceklerinden oluşan optik büyütme sistemi, mikroskobun ana gövdesidir; küresel sapmayı ve renk sapmasını ortadan kaldırmak için göz mercekleri ve mercekler karmaşık bir mercek grubundan oluşur; ③ Malzemeyi sabitlemek ve rahatlığı gözlemlemek için kullanılan mekanik cihaz.
Mikroskop nesnesi sadece büyütme ile belirlenmez, aynı zamanda mikroskobun çözme gücü (çözünürlük) ile de belirlenir, çözme gücü mikroskoba (veya insan gözüne hedeften 25 cm uzaklıkta) karşılık gelir ve nesneyi küçük aralıklarda ayırt edebilme yeteneğine sahiptir. Çözme gücünün boyutunun ayırt edilmesi, ışığın dalga boyu ve ayna ağız hızı ve ortamın kırılma indisi ile belirlenir ve aşağıdaki formülle ifade edilir:
R=0.61λ /NANA=nsin /2 burada: n=ortamın kırılma indisi;=ayna ağız açısı (gerginlik açısının objektif merceği ağzı üzerindeki örnek), NA=ayna ağız hızı (sayısal açıklık). Aynanın ağız açısı her zaman 180°'den küçük olmalıdır, dolayısıyla sina/2'nin zui değeri zorunlu olarak 1'den küçüktür.
Optik merceklerin üretiminde kullanılan camın kırılma indisi 1,65 ~ 1,78 olup, kullanılan ortamın kırılma indisi cama ne kadar yakınsa o kadar iyidir. Kuru objektif lens için hava ortamı, ayna ağız oranı genellikle 0.05 ~ 0,95'tir; Orta olarak sedir yağı içeren lens yağı, ayna ağız oranı 1,5'e yakın olabiliyor.
Sıradan ışık dalga boyu 400~700nm'dir, dolayısıyla mikroskobun çözme gücü değeri 0,2μm'den az olmayacaktır, insan gözünün çözme gücü 0,2 mm'dir, dolayısıyla mikroskobun zui büyütmesinin genel tasarımı genellikle 1000X'tir.
İkincisi, lazer eş odaklı tarama mikroskobu
Lazer eş odaklı tarama mikroskobu (lazer eş odaklı tarama mikroskobu), taramalı ışık kaynağı olarak bir lazerle, noktadan noktaya, satırdan çizgiye, yüzeyden yüzeye hızlı taramalı görüntüleme, taramalı lazer ve ortak bir objektifin floresans koleksiyonu, objektif taramalı lazer odaklama noktası aynı zamanda nesne noktasının anlık görüntülenmesi. Lazer ışınının dalga boyunun daha kısa olması nedeniyle ışın çok incedir, bu nedenle eş odaklı lazer tarama mikroskobu, sıradan bir optik mikroskobun yaklaşık 3 katı kadar yüksek bir çözünürlüğe sahiptir. Sistem bir kez odaklanır ve tarama, numunenin bir düzlemiyle sınırlıdır. Odaklanma derinliği aynı olmadığında, numunenin farklı derinlik seviyelerindeki görüntüleri elde edilebilir ve bu görüntü bilgileri bilgisayarda depolanır, bilgisayar analizi ve simülasyon yoluyla hücre numunesinin üç boyutlu yapısını gösterebilir. .
