Konfokal floresan mikroskobunun temel yapısı
(1) Tarama modülü
Tarama modülü temel olarak bir iğne deliği ışık çubuğu (optik dilimlerin kalınlığını kontrol eder), bir spektroskop (dalga boyuna göre ışığın yayılma yönünü değiştirir), bir emisyon floresans kolorimetresinden (tespit için belirli bir dalga boyu aralığındaki ışığı seçer) ve bir emisyon floresan kolorimetresinden oluşur. bir dedektör (fotoçoğaltıcı tüp). Floresan numunesindeki karışık floresans tarayıcıya girer ve tespit iğne deliği ışık çubuğu, spektrometre ve kolorimetre tarafından seçildikten sonra, farklı floresans kanallarında tespit edilen ve karşılık gelen eş odaklı görüntüler oluşturan çeşitli monokromatik floresanslara bölünür. Aynı zamanda, birkaç paralel monokromatik floresans görüntüsü ve bunların kompozit görüntüleri bilgisayar ekranında görüntülenebilir.
(2) Floresan mikroskopi sistemi
Mikroskop, sistemin görüntüleme kalitesiyle ilgili olan LSCM'nin ana bileşenidir. Mikroskop optik yolu, görüntüleme kalitesini ve ölçüm doğruluğunu etkilemeden optik seçeneklerle sonsuz mesafeli bir optik sisteme kolayca yerleştirilebilir. Hedef, floresans elde etme ve net görüntüleme için faydalı olan geniş bir sayısal açıklıklı düz alan apokromatik hedef olmalıdır. Objektif lens grubunun dönüştürülmesi, renk filtre grubunun seçimi, sahnenin hareket ayarı ve odak düzleminin hafıza kilitlemesinin tümü bilgisayar tarafından otomatik olarak kontrol edilmelidir.
Lazer taramalı konfokal mikroskopide kullanılan floresans mikroskobu genel olarak geleneksel bir floresans mikroskobu ile aynıdır, ancak kendi özelliklerine sahiptir: lazerin numuneyi ışınlamak ve yapmak için mikroskop hedefine girebilmesi için bir tarayıcıya bağlanması gerekir. numunenin yaydığı floresans dedektöre ulaşır; Cıva lambalarını lazerlere dönüştüren bir ışık yolu dönüştürme cihazı gereklidir ve cıva lambasının ışık yoğunluğu ayarlanabilir.
(3) Yaygın lazerler
Lazer taramalı konfokal mikroskopide kullanılan lazer kaynakları tek lazerli ve çoklu lazer sistemlerini içerir ve yaygın olarak kullanılan lazerler aşağıdaki üç türü içerir:
Yarı iletken lazer: 405nm (ultraviyole spektral çizgiye yakın)
Argon iyon lazeri: 457nm, 477nm, 488nm, 514nm (mavi yeşil ışık)
He-Ne lazer: 543nm (yeşil ışık He-Ne yeşil lazer) 633nm (kırmızı ışık He-Ne kırmızı lazer)
UV lazer (UV lazer): 351 nm, 364 nm (UV ışığı)
(4) Yardımcı ekipman
Hava soğutmalı, su soğutmalı soğutma sistemleri ve düzenlenmiş güç kaynakları.
Lazer taramalı eş odaklı mikroskobun temel çalışma prensibi, öncelikle lazerden belirli bir dalga boyunda uyarım ışığı yaymaktır. Amplifikasyondan sonra ışık, bir nokta ışık kaynağı oluşturmak için tarayıcıdaki aydınlatılmış iğne deliği ışık çubuğundan geçer. Objektif mercek numunenin odak düzlemine odaklanır ve numune üzerindeki karşılık gelen aydınlatılmış noktalar uyarılır ve floresans yayar. Algılama deliği ışık çubuğunu geçtikten sonra dedektöre ulaşır ve bilgisayar izleme ekranında görüntülenir. Bu şekilde, ışık dilimi adı verilen, odak düzlemindeki numunenin her noktasının floresans görüntüleri ile tam bir konfokal görüntü oluşturulur.
