Multifoton Lazer Tarama Mikroskobunun (MLSM) Avantajları ve Dezavantajları
Multifoton lazer tarama mikroskobu, üç boyutlu gözlem için daha iyi optik kesit yetenekleri sağlayan, lazer tarama mikroskobu teknolojisine dayalı deneysel bir yöntemdir. Çoklu fotonlu floresans uyarma yöntemi, örneklerin yüksek çözünürlüklü floresans görüntülerini toplamak için uzun dalga boylu kırmızı ışık veya yakın kızılötesi ışık kullanır ve bu, canlı örneklere minimum düzeyde zarar verir. Bu nedenle canlı hücre görüntülemesi, özellikle beyin dilimleri, embriyolar gibi kalın canlı dokuların görüntülenmesi için uygundur. Tüm organların, hatta tüm vücudun görüntülenmesi çalışmaları.
Avantajları aşağıdaki gibidir:
1. Uyarılmak için kırmızı ışık veya kızılötesi ışık kullanın ve ışık saçılımı küçüktür (küçük parçacıkların saçılması, dalga boyunun dördüncü kuvveti ile ters orantılıdır).
2. İğne deliğine gerek yoktur ve görüntüleme kesitinden daha fazla saçılmış foton toplanabilir.
3. İğne deliği, odaklanmamış alandan veya odak alanından yayılan dağınık fotonları ayırt edemez ve derin katmanlardaki çoklu foton görüntülemenin sinyal-gürültü oranı iyidir.
4. Tek fotonlu uyarım için kullanılan ultraviyole veya görünür ışık, ışın odak düzlemine ulaşmadan önce örnek tarafından kolayca emilir ve zayıflatılır ve derin katmanları uyarmak zordur.
5. Biyolojik mikroskop gözlemi açısından ilk dikkat edilmesi gereken, organizmanın aktif durumuna zarar vermemek ve su, iyon konsantrasyonu, oksijen ve besin akışını sürdürmektir. Işığın gözlemlenmesi durumunda hem ısı hem de foton enerjisinin ışınlama miktarı içerisinde kalması ve ışık enerjisinin hücrelerin zarar görmemesi gerekmektedir.
6. Multifoton mikroskobunun da birçok avantajı vardır. Örneğin, üç boyutlu çözünürlük, derinlik penetrasyonu, saçılma verimliliği, arka plan ışığı, sinyal-gürültü oranı, kontrol vb. açısından önceki lazer mikroskoplarının sahip olmadığı veya eşleştiremediği aşkın özellikler vardır.
Çok fotonlu eş odaklı lazer tarama mikroskobu, çeşitli araştırma ve uygulama alanlarına genişletildi. Numunelerin doğal hallerinde üç boyutlu tahribatsız gözlemini gerçekleştirebilir ve sistemin çözünürlüğünü ve sinyal-gürültü oranını geliştirebilir. Çoklu fotonlu uyarım malzemelerinin kullanılması Özelliklerdeki değişiklikler, yüksek uygulama değeri olan üç boyutlu yükseklik veri depolamayı ve herhangi bir yönde üç boyutlu mikro işlemeyi de gerçekleştirebilir. Çok fotonlu eş odaklı mikroskopi ile ilgili makine, malzeme, lazer teknolojisi vb.'nin daha da gelişmesiyle birlikte, daha fazla Fotonik eş odaklı lazer tarama mikroskobunun daha fazla gelişme ve daha geniş uygulama alanına sahip olacağına inanılmaktadır.
Dezavantajları aşağıdaki gibidir:
1. Sadece floresans görüntüleyebilir.
2. Numune, pigmentler gibi uyarım ışığını emebilen kromoforlar içeriyorsa numune ısıdan zarar görebilir.
3. Çözünürlük biraz azalır. Eş odaklı delikler aynı anda kullanılarak iyileştirilebilse de sinyal kaybı olacaktır.
4. Pahalı ultra hızlı lazerlerle sınırlı olduğundan, multifoton taramalı mikroskopların maliyeti nispeten yüksektir.
